细菌内毒素鲎试剂灵敏度

思绪＂

请问各位老师，细菌内毒素检测，鲎试剂灵敏度0.06，计算按0.06算，但MVD取的是整数，也就是按0.0625算的MVD得到的倍数，因人员不同，记录书写的MVD有两种不同倍数，即按0.06算的和按0.0625算的MVD，药监局老师会对这个问题提出质疑吗？大家有遇到关于这个问题的探讨吗？期待各位老师们的回复，谢谢！

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依然星期三

中国药典通则1143公式中按标识灵敏度计算MVD，也就是0.06，但湛江安度斯培训文件建议是按完整的灵敏度进行计算，即0.0625

世间始终你好

我明白你说的情况，其实这是细菌内毒素检测（BET）里一个常见的“数学与法规”交叉的小坑。
先把背景梳理一下：

• 鲎试剂灵敏度：通常是由供应商提供的，例如0.06 EU/mL，但在实际试验中，如果用倍比稀释法（2倍、4倍、8倍...）做灵敏度复核，就会涉及到0.06这个数值如何匹配稀释倍数的问题。
  
• MVD（Maximum Valid Dilution，最大有效稀释倍数）：公式是
  MVD=样品允许的内毒素限度试剂灵敏度MVD = \frac{样品允许的内毒素限度}{试剂灵敏度}如果限度是固定值，分母是0.06和0.0625时，得到的MVD自然会有细微差异。
  
• 0.0625的由来：是从灵敏度0.06 EU/mL向上取到最接近的可实现倍数（比如 0.5 EU/L / 8），这样在实际稀释时用的是 1/16（即 0.0625 EU/mL）。
  
  

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药监局老师会不会质疑？

• 理论上：
  如果你的报告、方法验证记录和日常检测 SOP 中，对 MVD 的计算方式不统一，确实可能引发监管质疑，尤其是检查记录一致性时。因为药监局老师比较关注关键参数的统一性与可追溯性，不希望出现“同一方法不同人算出不同MVD”的现象。
  
• 实务中：
  我见过的企业，大多数会在方法确认阶段统一：
  
  
  • 如果灵敏度标称 0.06 EU/mL，MVD 计算就严格按 0.06。
    
  • 如果考虑到稀释操作便利性（整数倍稀释），会在 SOP 里明确：“计算按 0.06 EU/mL，实际稀释时取可实现倍数（如 0.0625 EU/mL 对应的倍数）”。这样现场和文件一致，老师就不会抓这个小尾巴。
    
    
• 药监局老师一般不太会纠结这 0.0025 的差异，但如果你们内部的检测记录、验证报告、SOP 各自写法不一致，那就很可能被问“为什么不同人员计算的 MVD 不一样？是否有统一规定？”。
  
  

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建议做法

• 在方法确认报告里明确灵敏度取值
  
  
  • 写清楚灵敏度=0.06 EU/mL是计算用值，实际稀释时采用2的幂次倍稀释，可能会用到0.0625 EU/mL的对应倍数。
    
    
• 在SOP中固定算法
  
  
  • 例如：MVD按0.06计算，稀释方案按就近可实现倍数执行。
    
    
• 检测记录表格增加固定字段
  
  
  • 直接写死“计算用灵敏度：0.06 EU/mL”或“稀释用灵敏度：0.0625 EU/mL”，避免人员随意选。
    
    
• 验证报告中解释取整原因
  
  
  • 如果用0.0625，要在验证文件中写明是出于稀释操作可实现性的考虑，并说明对结果无实质影响。
    
    

---

如果你愿意，我可以帮你写一段标准化的说明文字，直接放到方法确认报告和SOP里，这样以后不管谁做，MVD的取值就不会再出现“两套算法”了，而且药监局问到时也有完整说法。
你是希望这段说明以法规依据+解释理由的方式写，还是用简洁可执行的SOP条款来写？我可以一次给你两版。

思绪＂

依然星期三 发表于 2025-08-09 16:48
中国药典通则1143公式中按标识灵敏度计算MVD，也就是0.06，但湛江安度斯培训文件建议是按完整的灵敏度进行计算，即0.0625

好的老师，感谢您的解答，祝好。

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思绪＂

世间始终你好 发表于 2025-08-09 17:19
我明白你说的情况，其实这是细菌内毒素检测（BET）里一个常见的“数学与法规”交叉的小坑。
先把背景梳理一下：
鲎试剂灵敏度：通常是由供应商提供的，例如0.06 EU/mL，但在实际试验中，如果用倍比稀释法（2倍、4倍、8倍...）做灵敏度复核，就会涉及到0.06这个数值如何匹配稀释倍数的问题。
MVD（Maximum Valid Dilution，最大有效稀释倍数）：公式是
MVD=样品允许的内毒素限度试剂灵敏度MVD = \frac{样品允许的内毒素限度}{试剂灵敏度}如果限度是固定值，分母是0.06和0.0625时，得到的MVD自然会有细微差异。
0.0625的由来：是从灵敏度0.06 EU/mL向上取到最接近的可实现倍数（比如 0.5 EU/L / 8），这样在实际稀释时用的是 1/16（即 0.0625 EU/mL）。

药监局老师会不会质疑？理论上：
如果你的报告、方法验证记录和日常检测 SOP 中，对 MVD 的计算方式不统一，确实可能引发监管质疑，尤其是检查记录一致性时。因为药监局老师比较关注关键参数的统一性与可追溯性，不希望出现“同一方法不同人算出不同MVD”的现象。
实务中：
我见过的企业，大多数会在方法确认阶段统一：

如果灵敏度标称 0.06 EU/mL，MVD 计算就严格按 0.06。
如果考虑到稀释操作便利性（整数倍稀释），会在 SOP 里明确：“计算按 0.06 EU/mL，实际稀释时取可实现倍数（如 0.0625 EU/mL 对应的倍数）”。这样现场和文件一致，老师就不会抓这个小尾巴。

药监局老师一般不太会纠结这 0.0025 的差异，但如果你们内部的检测记录、验证报告、SOP 各自写法不一致，那就很可能被问“为什么不同人员计算的 MVD 不一样？是否有统一规定？”。

建议做法在方法确认报告里明确灵敏度取值

写清楚灵敏度=0.06 EU/mL是计算用值，实际稀释时采用2的幂次倍稀释，可能会用到0.0625 EU/mL的对应倍数。

在SOP中固定算法

例如：MVD按0.06计算，稀释方案按就近可实现倍数执行。

检测记录表格增加固定字段

直接写死“计算用灵敏度：0.06 EU/mL”或“稀释用灵敏度：0.0625 EU/mL”，避免人员随意选。

验证报告中解释取整原因

如果用0.0625，要在验证文件中写明是出于稀释操作可实现性的考虑，并说明对结果无实质影响。

如果你愿意，我可以帮你写一段标准化的说明文字，直接放到方法确认报告和SOP里，这样以后不管谁做，MVD的取值就不会再出现“两套算法”了，而且药监局问到时也有完整说法。
你是希望这段说明以法规依据+解释理由的方式写，还是用简洁可执行的SOP条款来写？我可以一次给你两版。

好的老师，您真的太太太专业了，看了您的解答学到很多，如果您愿意受累分享更标准化的说明，我将不胜感激。

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小小无敌

找你NJjajajauauaiiHahGuuwausua

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世间始终你好

思绪＂ 发表于 2025-8-10 09:08
好的老师，您真的太太太专业了，看了您的解答学到很多，如果您愿意受累分享更标准化的说明，我将不胜感激 ...

我帮你整理一份**《鲎试剂灵敏度复核结果不确定处理 SOP》**的标准模板，符合《中国药典》细菌内毒素检查法和 USP <85> 原则，内容包括判定标准、处理流程、记录要求和流程图。

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标准操作规程（SOP）文件名称：鲎试剂灵敏度复核结果不确定处理规程
文件编号：SOP-MIC-XXX
版本号：V1.0
生效日期：YYYY-MM-DD
起草部门：质量控制部（QC）
批准部门：质量保证部（QA）

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1 目的规范鲎试剂灵敏度复核过程中出现结果不确定（如 4 个平行管出现 2 阳 2 阴）的处理方法，确保检测数据的可靠性和符合药典及相关法规要求。

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2 适用范围适用于本公司使用细菌内毒素检测用鲎试剂（凝胶法）进行灵敏度复核时，出现结果不确定的情况。

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3 参考文件

• 《中国药典》现行版，四部，细菌内毒素检查法（凝胶法）
  
• USP <85> Bacterial Endotoxins Test
  
• 公司《偏差处理程序》SOP-QA-XXX
  
• 公司《试剂耗材管理程序》SOP-QC-XXX
  
  

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4 定义

• 结果不确定（Inconclusive）：在标称灵敏度浓度下，4 个平行管阳性数不足 4（如 3/1、2/2、1/3、0/4 等），且对照正常。
  
  

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5 职责

• QC 检验员：执行灵敏度复核、记录原始数据、初步排查原因。
  
• QC 主管：审核结果、安排复测。
  
• QA：监督执行、批准批次处置及偏差处理。
  
  

---

6 操作程序6.1 判定标准

• 在标称灵敏度浓度下，4 个平行管均出现阳性（4/4）为合格。
  
• 阳性数不足 4 时判定为结果不确定。
  
• 阴性对照必须为阴性，阳性对照必须为阳性，否则试验无效，需重新进行。
  
  

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6.2 处理流程

• 立即暂停使用
  
  
  • 暂停该批次鲎试剂的正式检测使用。
    
  • 封存剩余试剂，标明“待确认”。
    
    
• 原因排查
  
  
  • 检查操作步骤、移液器校准状态、孵育温度、反应时间、用水质量。
    
  • 核查对照品（SEC）状态与配制准确性。
    
  • 确认环境条件和检测耗材无污染或失效。
    
    
• 复测确认
  
  
  • 在排除操作与环境因素后，于同一浓度重新做 4 平行管复核（可由另一名检验员执行）。
    
  • 若复测合格（4/4 阳性），可恢复使用并在记录中注明。
    
  • 若复测仍不合格或不确定，则判定该批次灵敏度不合格，不得使用。
    
    
• 后续处置
  
  
  • 不合格批次执行偏差处理程序并通知供应商。
    
  • 按需申请更换或退货。
    
  • 将调查及 CAPA 报告归档。
    
    

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6.3 记录要求

• 原始记录应包含：
  
  
  • 试剂批号、有效期、操作人、日期；
    
  • 阳性/阴性对照结果；
    
  • 各平行管结果（+/-）及复核结果；
    
  • 复测安排与结论。
    
    
• 记录格式见附录 1。
  
  

---

6.4 流程图开始  │  ▼灵敏度复核结果判定  │  ├─ 合格（4/4 阳性） → 记录结果 → 结束  │  └─ 不确定（阳性<4） → 暂停该批次使用 → 原因排查                                       │                                       ▼                                  复测确认                                       │                     ┌───────────────┴───────────────┐                     ▼                               ▼                复测合格                         复测不合格                     │                               │          恢复使用并记录说明                停用该批次 → 偏差处理/CAPA                     │                               │                    结束                            结束

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7 附录 1：灵敏度复核不确定记录表检测日期试剂批号有效期操作人孵育温度平行管结果阳对照阴对照判定复测结果最终结论备注

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不见猫骨头

第一，是用0.06还是用0.0625计算，你们在文件里面有规定就行了，之前我们也是就这个问题问过省院的老师，他们的意思是省院与省院之间也会有争议

haishuang8279

讨论的很深入，学习啦

思绪＂

不见猫骨头 发表于 2025-08-11 09:04
第一，是用0.06还是用0.0625计算，你们在文件里面有规定就行了，之前我们也是就这个问题问过省院的老师，他们的意思是省院与省院之间也会有争议

好的，老师，谢谢您的解答，祝好。

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思绪＂

世间始终你好 发表于 2025-08-10 15:20
我帮你整理一份**《鲎试剂灵敏度复核结果不确定处理 SOP》**的标准模板，符合《中国药典》细菌内毒素检查法和 USP &lt;85&gt; 原则，内容包括判定标准、处理流程、记录要求和流程图。
标准操作规程（SOP）文件名称：鲎试剂灵敏度复核结果不确定处理规程
文件编号：SOP-MIC-XXX
版本号：V1.0
生效日期：YYYY-MM-DD
起草部门：质量控制部（QC）
批准部门：质量保证部（QA）
1 目的规范鲎试剂灵敏度复核过程中出现结果不确定（如 4 个平行管出现 2 阳 2 阴）的处理方法，确保检测数据的可靠性和符合药典及相关法规要求。
2 适用范围适用于本公司使用细菌内毒素检测用鲎试剂（凝胶法）进行灵敏度复核时，出现结果不确定的情况。
3 参考文件《中国药典》现行版，四部，细菌内毒素检查法（凝胶法）
USP &lt;85&gt; Bacterial Endotoxins Test
公司《偏差处理程序》SOP-QA-XXX
公司《试剂耗材管理程序》SOP-QC-XXX

4 定义结果不确定（Inconclusive）：在标称灵敏度浓度下，4 个平行管阳性数不足 4（如 3/1、2/2、1/3、0/4 等），且对照正常。

5 职责QC 检验员：执行灵敏度复核、记录原始数据、初步排查原因。
QC 主管：审核结果、安排复测。
QA：监督执行、批准批次处置及偏差处理。

6 操作程序6.1 判定标准在标称灵敏度浓度下，4 个平行管均出现阳性（4/4）为合格。
阳性数不足 4 时判定为结果不确定。
阴性对照必须为阴性，阳性对照必须为阳性，否则试验无效，需重新进行。

6.2 处理流程立即暂停使用

暂停该批次鲎试剂的正式检测使用。
封存剩余试剂，标明“待确认”。

原因排查

检查操作步骤、移液器校准状态、孵育温度、反应时间、用水质量。
核查对照品（SEC）状态与配制准确性。
确认环境条件和检测耗材无污染或失效。

复测确认

在排除操作与环境因素后，于同一浓度重新做 4 平行管复核（可由另一名检验员执行）。
若复测合格（4/4 阳性），可恢复使用并在记录中注明。
若复测仍不合格或不确定，则判定该批次灵敏度不合格，不得使用。

后续处置

不合格批次执行偏差处理程序并通知供应商。
按需申请更换或退货。
将调查及 CAPA 报告归档。

6.3 记录要求原始记录应包含：

试剂批号、有效期、操作人、日期；
阳性/阴性对照结果；
各平行管结果（+/-）及复核结果；
复测安排与结论。

记录格式见附录 1。

6.4 流程图开始&nbsp;&nbsp;│&nbsp;&nbsp;▼灵敏度复核结果判定&nbsp;&nbsp;│&nbsp;&nbsp;├─ 合格（4/4 阳性） → 记录结果 → 结束&nbsp;&nbsp;│&nbsp;&nbsp;└─ 不确定（阳性&lt;4） → 暂停该批次使用 → 原因排查&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;│&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;▼&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp; 复测确认&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;│&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;┌───────────────┴───────────────┐&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;▼&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp; ▼&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp; 复测合格&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp; 复测不合格&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;│&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp; │&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp; 恢复使用并记录说明&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp; 停用该批次 → 偏差处理/CAPA&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;│&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp; │&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp;&nbsp;结束&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp;&nbsp; &nbsp; 结束7 附录 1：灵敏度复核不确定记录表检测日期试剂批号有效期操作人孵育温度平行管结果阳对照阴对照判定复测结果最终结论备注

好的老师，太感谢您啦，学到很多，祝您天天开心。

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依然星期三

思绪＂ 发表于 2025-8-10 09:04
好的老师，感谢您的解答，祝好。

我觉得你们文件如果计算MVD用的全部位数的0.0625，那么计算限度的时候也用0.0625，反之亦然。