HCP ELISA开发--本底进化之路

Freyaun0

背景：

ELISA介绍：

酶联免疫吸附实验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay, ELISA）是一种基于抗体-抗原-抗体特异性结合形成三明治复合物的高灵敏度、高特异性的免疫检测技术。鉴于其发展历史较久，技术积累成熟，且操作简便、成本较低、可高通量检测，广泛应用于医学（医疗器械和精密仪器）、生物学、药学、农业、食品安全等领域。根据使用应用的需要，可以分为直接法，间接法，夹心法和竞争法等。

根据ELISA的特点，其常见应用有：病毒/细菌/寄生虫的定性检测，蛋白抗原定量，抗体效价和信号通路的定性和定量研究；药物研发与质量控制相关的血液和组织液中的药物定量，生物制品的效价测定等。

ELISA的显著特点有：通过标准曲线，精确定量抗原分子浓度；定性筛查样本中目标抗原的存在与否；高通量检测大量样本；检测限度达到ng/mL，pg/mL的高灵敏度分析；以及抗原抗体特异性反应的亲和能力。

其中，标准曲线是定量的最终依据，其主要体现的方面有：1.标曲是定量分析的核心依据，通过已知浓度标准品和对应的检测出信号，拟合成数学模型，来反算样本浓度；2.通过最低检测限和最低定量限，线性范围和重复性，来验证实验的可靠；3.根据斜率和截距判断独立实验的正常与否；数据可比性和标准化，来校正数据和减少批间差异。

在ELISA检测中，Sum of Squares Error (SSE，误差平方和) 是数据分析的重要统计量，主要用于评估标准曲线拟合的准确性以及实验数据的离散程度。表示实际观测值（实验数据点）与拟合曲线（如标准曲线）预测值之间的偏差平方和。可以评估标准曲线的拟合优度，SSE越小，说明实际数据点与拟合曲线的偏差越小，曲线拟合效果越好，反之，提示此次实验模型不恰当；另外，在同一批次ELISA板中，不同标准曲线的SSE应接近，并结合R²等统计项目，来判断实验条件的重复性、可靠性和稳定性。见图1，图2。

ELISA Blank作用：

Blank孔不仅直接影响SSE的计算（校正OD=实测OD-Blank OD，Blank孔OD值不稳定或异常，会导致校正后的数据偏差增大，从而增加SSE，降低拟合精度。）；Blank孔的较大差异，会体现实验的系统误差；高Blank信号导致低浓度标准点的计量为负数，扭曲标准曲线，增大SSE。

另外，在《酶联免疫吸附法检测试剂注册技术审查指导原则》，《定量检测试剂分析性能评估指导原则》，EP17-A2和《Immunoassay Devices Guidance for Industry》中，均提到定量检测中的Blank孔，明确要求ELISA实验需设置空白孔，并规定其信号应显著低于最低校准品信号（通常要求Blank OD ≤ 最低校准品OD的50%）；或者要求空白孔用于确定检测限（LOD），其OD值需满足：均值 + 2SD ≤ 低浓度校准品OD值；TMB显色时450 nm波长下OD值一般≤0.1；强调空白孔的重复性（CV值应≤20%）等。

[img]blob:https://www.ouryao.com/642f237e-6edd-4c4f-9f3b-b028f145bfc1[/img]

图1、2

实际应用：

因为免疫实验的所有形式测量，都需要标准化。所以对Blank孔的控制是ELISA水平重要的具体体现之一。

赛唐生物历时3年，在开发E.coli/CHO/293/SC Yeast/HS Yeast/PP Yeast HCP ELISA过程中，长期坚持打磨基础技术，对Blank本底进行了显著的控制，下降比例达10倍。并统计上百次实验数据，发现Blank从0.1，降低到0.05水平，再到0.01水平。与Cygnus相比本底，降低2-10倍。见表1，图10。为后续药物ELISA定量检测，提供了扎实的体系支持。

[img]blob:https://www.ouryao.com/d2864d98-bc2c-4905-afc9-b9a862dd1e4d[/img]

图3、4、5

[img]blob:https://www.ouryao.com/4cf4ef0b-c987-4d52-9928-835abd1aeeb6[/img]

图6、7、8

[img]blob:https://www.ouryao.com/1ea7d6b7-b5bb-485e-85c5-53764c2d8cba[/img]

图9、10

	2023	2024	2025
E.coli	0.104	0.021	0.011
CHO	0.090	0.034	0.021
293	0.072	0.053	0.014
SC			0.011
PP	0.089	0.111	0.009
HS			0.004
Cygnus-E.coli		0.07
Cygnus-CHO		0.07	0.05

表1

参考标准：

《酶联免疫吸附法检测试剂注册技术审查指导原则》

《定量检测试剂分析性能评估指导原则》

《EP17-A2: Evaluation of Detection Capability for Clinical Laboratory Measurement Procedures; Approved Guideline—Second Edition》

《Immunoassay Devices Guidance for Industry》

上海赛唐生物技术有限公司，专注于生物医药工业检测领域15年研发，推出HCP残留检测系列产品，以及HCP专属性抗体制备、覆盖度分析等全流程技术服务！

https://www.cellgenebio.com         https://www.bluegene.cc   

更多产品系列：

Cellgene Bioscience-Drug Residue Products
Host Cell Protein ELISA kits (HCP)
CH-K0018-2	CHO Host Cell Protein (CHO HCP) ELISA kit, G2
CH-K0018-3	CHO Host Cell Protein (CHO HCP) ELISA kit, G3
HH-H0019-2	HEK293 Host Cell Protein (HEK293 HCP) ELISA kit, G2
EH-E0020-3	E. coli Host Cell Protein (E. coli HCP) ELISA kit, G3
PH-E0021-3	Pichia Pastoris Host Cell Protein (PP HCP) ELISA kit, G3
HP-H0023-3	Hansenula Polymorpha Host Cell Protein ELISA kit, G3
SC-H0024-3	Saccharomyces Cerevisiae Host Cell Protein ELISA kit, G3
SF-H0025-3	Spodoptera Frugiperda 9 Host Cell Protein ELISA kit, G3
Medium Residues Detection kits
NEGES0890	Protein A ELISA Kit (Boiling)
NEGEP0890	Protein A ELISA Kit
NE03I0431	Mouse Immunoglobulin G ELISA Kit
NE11I0431	Bovine Immunoglobulin G ELISA Kit
NE01I0431	Human Immunoglobulin G ELISA Kit
NE06I0431	Goat Immunoglobulin G ELISA Kit
NEGEK0006	Kanamycin ELISA Kit
NEGEP1270	Protein L ELISA Kit
NEGEP1271	Protein G ELISA Kit
NEGES0014	Bovine Serum Albumin ELISA Kit
NEGES0015	Human Serum Albumin ELISA Kit
NEGED0018	Dextran Sulfate Salt Detection kit
Host Cell DNA Detection kits (HCD)
NS-D050T/NS-D100T	NS0 Host Cell DNA (NS0 HCD) Residue Detection kit
EC-D050T/EC-D100T	E.coli Host Cell DNA (E.coli HCD) Residue Detection kit
VE-D050T/VE-D100T	Vero Host Cell DNA (Vero HCD) Residue Detection kit
HK-D050T/HK-D100T	HEK293 Host Cell DNA (HEK293 HCD) Residue Detection kit
CH-D050T/CH-D100T	CHO Host Cell DNA (CHO HCD) Residue Detection Kit
PP-D050T/PP-D100T	Pichia Pastoris Host Cell DNA (PP HCD) Residue Detection Kit
CG-DP050/CG-DP100	Magnetic Residual DNA Sample Preparation Kit
Host Cell Protein Antibodies
CH-K0018-3-Ab	CHO Host Cell Protein G3 Antibody
CH-K0018-2-Ab	CHO Host Cell Protein G2 Antibody
EH-E0020-3-Ab	E.coli Host Cell Protein G3 Antibody
PH-E0021-2-Ab	Pichia Yeast Host Cell Protein G2 Antibody
HH-H0019-2-Ab	HEK293 Host Cell Protein G2 Antibody
Buffer Products
CG-H0100	HCP ELISA buffer
CG-P0200	Protein L ELISA buffer