菌悬液的计数及培养

绯浠

想问一下各位老师，在用平皿法对菌液进行计数时，各个菌种的培养时间和培养温度是哪个范围，是按药典1105里面计数培养基适用性检查规定的温度和时间吗

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Mr●小肚子♂

对.....................对

绯浠

Mr●小肚子♂ 发表于 2025-08-20 09:45
对.....................对

是我表达不太准确吗，为啥中间有省略号

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机智鼠

作为药学和医疗器械领域的专家，关于菌悬液的计数及培养问题，现回复如下：

平皿法（平板计数法）中不同菌种的培养条件需依据其生物学特性确定。通常细菌类采用37℃培养24–48小时；水产品相关微生物因适应低温环境，多使用30℃培养。具体参数应结合目标菌种的生长曲线优化选择，并非统一适用药典1105条款的规定。实际操作时建议通过预实验验证适宜条件，并符合《中国药典》通则中微生物限度检查的相关要求。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

1546175169

药典是参考，你要在药典范围内做验证啊，才能得到一个合适的温湿度啊

hlmxjzb@163.com

又一个小白

安安份份的小尘1

在平皿法菌落计数中，不同微生物的培养温度和时间需根据菌种特性和检测标准确定，并非完全统一。以下是常见分类及参考依据：

一、常见菌种培养条件

  1. 细菌总数（如生活饮用水、食品）

       温度：36℃ ± 1℃

       时间：48 ± 2小时

       依据：

           生活饮用水菌落总数检测（平皿计数法）采用此条件。

           食品细菌总数检测同理。

  2. 霉菌和酵母菌计数

       温度：25℃ ~ 28℃（常见28℃ ± 1℃）

       时间：5 ~ 7天

       依据：

           食品微生物检验中，霉菌/酵母培养温度为28℃ ± 1℃，时间5天。

           真菌总数检测需25℃ ~ 28℃培养3 ~ 7天。

  3. 环境监测（如空气、水体）

       温度：30℃ ~ 35℃

       时间：≥ 48小时

       依据：环境样品预培养常用此范围。

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二、与《中国药典》1105的关系

《中国药典》1105章节规定的“计数培养基适用性检查”条件（如30 ~ 35℃培养3天）[注1]，仅适用于培养基的验证，而非实际样品的菌落计数。

   实际检测中：需根据具体样品类型（如药品、食品、水）和靶微生物（细菌、霉菌等），遵守对应标准：

       药品微生物计数：优先遵循药典正文（如1101无菌检查、1105非无菌产品计数）对具体菌种的规定[注2]。

       非药品样品：按行业标准执行（如GB 4789.2-2022食品菌落总数、GB/T 5750.12-2023生活饮用水微生物检测）。



注1：药典1105中，培养基适用性检查使用3株标准菌株（如大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌），在30 ~ 35℃培养≤3天验证复苏能力。

注2：药典1105.1规定，常规细菌计数采用30 ~ 35℃培养3 ~ 5天，霉菌/酵母采用20 ~ 25℃培养5 ~ 7天。

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三、操作注意事项

  1. 严格无菌操作：包括样品稀释、倾注平皿等步骤。

  2. 稀释液选择：生理盐水或缓冲液（含损伤菌保护剂如蛋白胨）。

  3. 培养一致性：温度波动需≤1℃，时间精确到±2小时。

结论

培养条件需根据检测对象（细菌/真菌）和适用标准灵活调整：

   细菌总数：36±1℃, 48±2小时（生活饮用水、食品）；

   霉菌/酵母：25~28℃, 5~7天；

   药典样品：优先按药典正文要求，非适用性检查条件。

建议以具体产品的强制检测标准为准，并验证方法适用性。



参考资料：

生活饮用水菌落总数检测（36±1℃, 48h）

霉菌/酵母培养（28±1℃, 5~7天）

平板菌落计数通用步骤（温度/时间控制要点）

绯浠

1546175169 发表于 2025-08-20 10:53
药典是参考，你要在药典范围内做验证啊，才能得到一个合适的温湿度啊

可能是我表达不准确，我想问一下各位老师怎么制备100cfu/ml的菌悬液，如果我用平皿法每稀释级都进行计数的话，那我应该用哪个培养基进行计数，培养时间又是多长，是参照药典1105里表1计数培养基适用性检查里的培养时间跟培养温度吗

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蜻蜓队长前来觐

绯浠 发表于 2025-8-20 11:04
可能是我表达不准确，我想问一下各位老师怎么制备100cfu/ml的菌悬液，如果我用平皿法每稀释级都进行计数 ...

1.从工作菌种用接种环粘一环菌液到10mlTSB、SDB(按照药典时间培养）
2.10ml取1ml到9mlpH7.0无菌蛋白胨水里面，重复操作5-8次，然后从5-8次中依次去1ml菌液到空平皿内倾注温度不大于45℃的TSA和SDA进行计数，看到底稀释到那个级别你能得到每1ml不大于100cfu/ml的菌液
3.多试几次，这样你基本上就知道稀释级别了

绯浠

蜻蜓队长前来觐 发表于 2025-08-20 11:35
1.从工作菌种用接种环粘一环菌液到10mlTSB、SDB(按照药典时间培养）
2.10ml取1ml到9mlpH7.0无菌蛋白胨水里面，重复操作5-8次，然后从5-8次中依次去1ml菌液到空平皿内倾注温度不大于45℃的TSA和SDA进行计数，看到底稀释到那个级别你能得到每1ml不大于100cfu/ml的菌液
3.多试几次，这样你基本上就知道稀释级别了

计数时的培养时间跟温度是多少呢

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为了微生物

1546175169 发表于 2025-8-20 10:53
药典是参考，你要在药典范围内做验证啊，才能得到一个合适的温湿度啊

？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？？

不见猫骨头

如果你是和药品相关的，按照药典规定就好了，谁来了也挑不出毛病；如果你是医疗器械相关的，按照医疗器械强检标准规定的进行，药典可以参考；化妆品和食品，没接触过，不知道

蜻蜓队长前来觐

1546175169 发表于 2025-8-20 10:53
药典是参考，你要在药典范围内做验证啊，才能得到一个合适的温湿度啊

现在药典都成了参考了吗

蜻蜓队长前来觐

绯浠 发表于 2025-8-20 11:51
计数时的培养时间跟温度是多少呢

药典1105微生物计数法