生孢梭菌平板计数不成功是哪些原因造成的？

大方yj0

实验室生孢梭菌数次平板计数均为成功，每次都是一个菌落都未培养出。
1.排除了冻存管问题
2.排除了稀释步骤问题
3.考虑了生孢梭菌的厌氧问题，采用了厌氧包
在进行无菌方法学实验时，供试品管与对照管（采用封闭式薄膜滤器）均在培养后的第一天呈阳性，但计数的培养皿均为长菌。
请教同行，生孢梭菌的平板计数有哪些需要考虑的细节？

lxiaof

应该还是厌氧问题，换一个厌氧包试试。

大方yj0

lxiaof 发表于 2025-10-22 10:34
应该还是厌氧问题，换一个厌氧包试试。

换过的，也不行

lxiaof

大方yj0 发表于 2025-10-22 11:01
换过的，也不行

菌株活率有问题，可以换个菌株再试试。先把菌液浓度放高一点，先培养出来再说。平板培养基的适应性也研究下，是否适合培养生孢梭菌，用对照培养基对照培养看看

34f54f29

验证的供阳和对照生长了，平板没长，说明可能是厌氧环境问题。
厌氧指示条显示正常么？是不是没有密封好

八档丶电风扇

1.厌氧培养的时候密封性问题导致厌氧环境破坏；
2.稀释→接种→放入厌氧环境时间过长，导致菌株死亡；
3.方法验证FTM长了，不代表菌株活性就好，比较在FTM里面菌株很少也能长起来；
4.生孢梭菌计数可以采用FTM来计数，这样操作起来比较简单，也不容易出问题；

不见猫骨头

动作要快，姿势要帅；在生孢计数的时候，稀释好就往空平皿里面加，加完就倾注，完了直接塞进厌氧盒，对应的厌氧包和氧气指示剂也塞进去，速度越快越好，生孢严格厌氧菌，在空气中暴露时间越长，死的越多

爱吃鸡蛋的橘子

我们也遇到这个问题，具体是：菌液对照组（涂布TSA供阳）正常，实验组（薄膜过滤回收）一个也不长，实验过程中也按照北京三药的技术老师的要求来严格操作的，还是不行，找不到原因

Mr●小肚子♂

1.培养基问题：用CARM，不要过度灭菌，PH是否符合
2.培养环境问题：产气袋多放两个，放指示条，看是否为厌氧环境，是否培养盒的密封不好

Mr●小肚子♂

爱吃鸡蛋的橘子 发表于 2025-10-22 14:24
我们也遇到这个问题，具体是：菌液对照组（涂布TSA供阳）正常，实验组（薄膜过滤回收）一个也不长，实验过 ...

你这很有可能是样品抑菌性没去除啊

爱吃鸡蛋的橘子

Mr●小肚子♂ 发表于 2025-10-22 14:36
你这很有可能是样品抑菌性没去除啊

不是，我就是纯蛋白胨缓冲液试验的，也问了泰林滤膜厂家，他们说没有做过生孢的生长试验

Minusone

大概率还是厌氧条件不满足，才导致平皿无法生长。

大方yj0

Mr●小肚子♂ 发表于 2025-10-22 14:35
1.培养基问题：用CARM，不要过度灭菌，PH是否符合
2.培养环境问题：产气袋多放两个，放指示条，看是否为厌 ...

很小的盒子，放了两个产气袋，再加两摞平皿就满了，但是我们确实没有指示条，然后盒子再用封口膜缠了一下

大方yj0

八档丶电风扇 发表于 2025-10-22 11:32
1.厌氧培养的时候密封性问题导致厌氧环境破坏；
2.稀释→接种→放入厌氧环境时间过长，导致菌株死亡；
3. ...

用液体培养基来计数，官方认可吗？

八档丶电风扇

大方yj0 发表于 2025-10-27 15:32
用液体培养基来计数，官方认可吗？

是流体培养基，培养前混匀、培养过程只要你不去动他，他就是可以看出单独菌落的
官方是认可的，只是看结果要及时

大方yj0

感谢大家支招，后来一家生物耗材公司提供了试用的厌氧袋，一次就做成功了，培养的特别好