请教一下大佬细菌内毒素

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内毒素检查产品用缓冲液pbs溶解的样品，pbs（磷酸盐类缓冲液）主要成分是磷酸氢二钠和磷酸二氢钠，氯化钠和氯化钾，按理论来说这些成分对鲎试剂酶活也没啥干扰性，目前做出来样品稀释4倍，64倍，100倍，800倍，1600倍加标2λ都不凝固，会有其他原因干扰酶活吗。

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最佳答案

加一些镁离子吧，样品中含有磷酸根离子、磷酸氢根离子、磷酸二氢根离子等，鲎试剂中的钙镁离子会和上述阴离子形成磷酸钙、磷酸镁等微溶物；由于鲎试剂中的钙镁离子被消耗，无法正常与内毒素反应。 或者你可以搜一下磷酸氢二钠细菌内毒素检查的文章，之前做的时候好像是参考它做的

• 不见猫骨头
• 发表于2025-10-29
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深蓝如云

样品是否有干扰

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深蓝如云 发表于 2025-10-29 16:58
样品是否有干扰

样品就是磷酸盐缓冲液，做的目的就是看他多少倍稀释能排除干扰，

不见猫骨头

加一些镁离子吧，样品中含有磷酸根离子、磷酸氢根离子、磷酸二氢根离子等，鲎试剂中的钙镁离子会和上述阴离子形成磷酸钙、磷酸镁等微溶物；由于鲎试剂中的钙镁离子被消耗，无法正常与内毒素反应。
或者你可以搜一下磷酸氢二钠细菌内毒素检查的文章，之前做的时候好像是参考它做的

机智鼠

内毒素检查是确保医疗器械和药品安全性的重要步骤，其准确性至关重要。您提到的使用PBS（磷酸盐缓冲液）溶解样品进行内毒素检测，理论上PBS的成分如磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、氯化钠和氯化钾对鲎试剂的酶活性应无显著干扰。然而，实际操作中可能存在多种因素导致检测结果异常。

首先，尽管PBS成分理论上不干扰，但实际配制过程中的纯度、pH值、离子强度等微小差异可能影响鲎试剂的反应性。其次，样品本身的性质，如含有的蛋白质、多糖或其他生物大分子，也可能与鲎试剂发生非特异性结合或竞争性抑制，从而干扰内毒素的检测。此外，操作过程中的污染、鲎试剂的质量及保存条件也是不可忽视的因素。

针对您的情况，建议首先确认PBS的配制是否符合标准要求，并检查鲎试剂的有效期和储存条件。同时，考虑采用其他类型的缓冲液或优化样品处理方法，以排除潜在的干扰因素。如果问题依旧存在，建议咨询专业的药学或医疗器械检测机构，进行更深入的分析和验证。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】

羽遥

也可能是 PBS 配制时 pH 偏离鲎试剂适宜范围（通常 6.0-8.0），或样品稀释后渗透压异常

米西米西西米露

你先用PBS做一下内毒素试试，如果PBS内毒素没问题，应该就是PBS无法消除样品干扰，你就需要重新开发方法

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米西米西西米露 发表于 2025-10-30 09:01
你先用PBS做一下内毒素试试，如果PBS内毒素没问题，应该就是PBS无法消除样品干扰，你就需要重新开发方法

目前就是pbs加标样品不凝固，稀释了也不凝固

hlmxjzb@163.com

样品稀释4倍，64倍，100倍，800倍，1600倍加标2λ都不凝固，应该是缓冲液的问题。里面有什么物质，抑制了鲎试剂反应。用BET水稀释一定量后看看是否凝固，或者换其他试剂洗脱行吗

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hlmxjzb@163.com 发表于 2025-10-30 09:59
样品稀释4倍，64倍，100倍，800倍，1600倍加标2λ都不凝固，应该是缓冲液的问题。里面有什么物质，抑制了鲎 ...

目前问了鲎试剂厂商就是磷酸盐类的干扰性很大，加镁离子这种

胜利者

如果浓度高一样有影响
必需做干扰试验