USP：亚硝胺杂质在药物分析中的挑战

沁人绿茶.

FDA在2024年11月8-9日，联合了HESI，USP，多家制药外企进行了2天的workshop，主题是：可接受的活性物质相关的亚硝胺杂质（NDSRI）摄入和处方更新后药物的生物等效性评估方法的最新进展。本文由USP科学家分享，主要内容如下：深入探讨了亚硝胺类杂质在药物中的分析挑战。文章强调了亚硝胺杂质检测的重要性，并详细讨论了分析方法的灵敏度、选择性、样品制备、参考标准的质量和可用性，以及如何避免分析过程中的干扰和污染等问题。

亚硝胺杂质风险评估：根据FDA的指导文件，药物生产商需要在6个月内对亚硝胺杂质的风险进行评估，并基于药物的优先级进行。

确证性测试：当存在亚硝胺存在的风险时，需要使用特定和灵敏的分析方法进行测试。

报告变更：在指导文件发布后的3年内，需要通过DMF修正案或药物申请来报告变更。

分析方法的灵敏度要求

FDA指南：对于每日最大剂量（MDD）小于880毫克/天的产品，检测限（LOQ）应≤0.03ppm；对于MDD大于880毫克/天的产品，LOQ应尽可能低。

分析方法特性：需要具有特异性、优秀的色谱分离能力和高灵敏度的检测能力。

常见分析挑战

灵敏度问题：需要在ppm级别进行检测，通常使用LC-MS和GC-MS技术，但LOQ可能会随时间显著变化。

基质效应：基质效应可能会人为降低定量结果，引入重现性挑战，并导致选择性和灵敏度问题。

选择性问题：当干扰化合物与目标亚硝胺共洗脱时，可能需要使用准确质量技术，如串联质谱或高分辨率准确质量系统。

分析过程中亚硝胺的形成：分析和/或样品制备过程中可能会形成人工亚硝胺。

干扰和污染：会影响选择性、准确性和精确性。

  参考标准的质量和可用性：使用特征不良的参考标准可能会增加假阳性的风险和灵敏度问题，导致亚硝胺的不准确定量。

参考标准的质量和可用性

案例研究：Ticagrelor的案例研究展示了复杂合成过程和对可信供应商的挑战。

供应商问题：一些供应商提供的参考标准缺乏充分的表征和支持数据，导致内部分析工作表明测试材料并非所声称的物质。

选择性问题：高或低分辨率质谱？

  NDMA与DMF的共洗脱：高分辨率质谱可以提供更好的质量估计精度，从而提高选择性。

分辨率和质量精度：至少需要45,000的分辨率和最大15ppm的质量容差，以防止在NDMA和DMF共洗脱时高估NDMA。

基质效应、样品制备和亚硝胺的人工形成

基质效应：基质中的物质会影响MS的离子化，导致离子抑制或增强，从而影响定量测量。

样品制备：样品制备是评估药物物质和药物产品中亚硝胺水平的关键步骤，不当的样品制备可能导致亚硝胺的丢失或生成。

人工形成亚硝胺：在GC分析中，高温、二烷基胺（如二甲胺）的存在可能导致亚硝胺的形成。

包装中的亚硝胺前体

案例研究：橡胶塞作为包装组件，可能含有亚硝胺前体。

干扰和污染

  LC-MS分析中的干扰和污染：会导致信噪比降低，背景/基线升高，影响灵敏度和重现性。

避免污染：在样品制备过程中，防止手套、膜、溶剂、离心管等物品的交叉污染至关重要。

USP的亚硝胺活动

文件标准：USP开发了通用章节<1469>亚硝胺杂质，以解决药典角度的亚硝胺杂质安全问题。

参考标准：建立了8种USP参考标准，支持通用章节<1469>亚硝胺杂质。