【求助】白蛋白纳米粒制备过程粗乳和高压均质后的样品放置后发生分层属于正常现象吗？

zhiji201409

刚开始接触白蛋白纳米粒的项目，制备样品过程发现，粗乳和高压均质后的样品放置后都发生分层现象，属于正常现象吗？粗乳步骤摸索了不同剪切转速和时间制得的样品放置后均会发生分层。

世间始终你好

下面给你一个专业但容易上手的分析，帮助你判断白蛋白纳米粒（Albumin nanoparticles）在粗乳阶段和高压均质（HPH）后的分层是否正常、可能原因是什么、以及应该从哪里排查。

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一、你的现象是否“正常”？简短回答：不完全正常，但在前期摸索阶段非常常见。
白蛋白纳米粒制备的关键步骤是将粗乳 → 细乳（HPH）→ 稳定分散体。
如果你在：

• 粗乳后分层
  
• 高压均质后仍分层
  
  

说明体系的初级稳定性不足，但在前期摸索配方、剪切条件、蛋白浓度、辅料前，这种情况非常常见。
粗乳分层 = 很常见（可接受）
高压均质后仍分层 = 不正常，表示体系还没有实现稳定胶体结构

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二、白蛋白纳米粒分层最常见的原因这里我按“最常见→最不常见”排序，方便你逐条排查：

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1. 粗乳阶段：剪切不足或粗乳粒径过大粗乳本质是一个“粗分散体”，如果：

• 剪切转速不够
  
• 剪切时间过短
  
• 粘度太低
  
• 初乳粒径 > 5–10 µm
  
  

那几乎一定会快速分层。
排查方法：
用激光粒度仪测粗乳粒径 D90，如果 > 10 µm，分层几乎必然发生。

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2. 白蛋白浓度太低 → 难以形成稳定核心结构白蛋白纳米粒在乙醇脱溶或热法中，需要一定浓度才能形成均一颗粒。
通常要求：

• 白蛋白 ≥ 5%（w/v）较稳定
  
• < 3% 时极易分层、絮凝或漂浮
  
  

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3. 体系离子强度/电荷不足 → Zeta电位太低白蛋白纳米粒电荷不足会导致：

• 静电排斥不够
  
• 粒子易聚集
  
• 分层明显
  
  

一般要求：

• Zeta电位 |>| 25 mV 才能保持胶体稳定。
  
  

如你的体系有：

• PBS
  
• NaCl
  
• 金属离子
  都会影响表面电荷。
  
  

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4. 高压均质条件不够（次数/压力设置不对）如果 HP homogenization：

• 压力<600 bar
  
• 循环次数 < 3–5 次
  
  

则很难得到真正稳定的纳米结构。
通常设置：

• 600–1500 bar
  
• 5–10 cycles
  
  

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5. 有机相或致沉剂比例不对（如果你用脱溶法）例如：

• 乙醇/丙酮 注入速率不稳
  
• 有机溶剂比例太低或太高
  
• 温度不合适
  
  

都会导致纳米粒形成不完全 → 产生分层。

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6. 未添加稳定剂 / 表面修饰剂白蛋白本身有一定稳定性，但某些体系仍需要：

• PEG
  
• 磷脂
  
• Tween 80
  
• 低浓度糖（蔗糖、海藻糖）
  
  

来提供空间位阻 / 电荷稳定。

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三、必须判断分层类型（关键）观察样品：
1）轻微分层（上层澄清、下层浑浊）= 粒径分布宽、粗乳不足
2）完全分层（上层透明、下层沉积）= 强烈的颗粒聚集（凝聚/絮凝） → 配方不稳定
3）漂浮层（上层出现白色漂浮）= 蛋白气泡吸附或疏水聚集
不同分层模式对应不同解决方案。

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四、你应该优先检查的 3 个关键数据为了判断问题在哪，你最好测：
1. 粒径（DLS）

• 粗乳 D90（越小越好）
  
• 均质后 D50、PDI（PDI < 0.2较稳定）
  
  

2. Zeta 电位

• 絕對值越高越不易分层：
  |Zeta| ≥ 25mV 通常较稳定
  
  

3. 固含量 / 蛋白浓度

• 太低一定不稳
  
  

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五、如何逐步改善？（按优先级顺序）1. 优化粗乳条件

• 8000–12000 rpm
  
• 5–10 min
  
• 注意温度不要太高（避免蛋白变性）
  
  

2. 增加白蛋白浓度提高到 4–6%（w/v）试试看。
3. 调整均质条件

• 压力 800–1200 bar
  
• 循环 5–10 次
  
  

4. 增加稳定剂 / 调整体系 pHpH away from pI（白蛋白等电点约 4.7）
通常在 pH 7–8 稳定性较好。

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六、总结（核心答案）粗乳分层：基本正常。
高压均质后仍分层：不正常 → 表示配方或工艺还不稳定。
最可能的原因包括：

• 粗乳剪切不够
  
• 白蛋白浓度太低
  
• 电荷不足（Zeta 电位太小）
  
• 高压均质条件不够
  
• 无稳定剂
  
• 有机溶剂比例/加料方式不当
  
  

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