各位懂非无菌微生物的大佬们

吐司

请问我们公司非无菌产品药典写明不可有金葡铜绿，请问我要怎么做控制菌检查，药典1105 1106 1107看了很多遍了还是不太懂

吐司

请问有具体的操作方法吗

wzzz2008

有
药典写的其实非常清楚。但你看不懂。。。。
这种情况下，建议直接向领导求助，说你不会。

听说之前有个看不懂红外图谱的，后来去吃公家饭了。

吐司

wzzz2008 发表于 2026-1-13 14:10
有
药典写的其实非常清楚。但你看不懂。。。。
这种情况下，建议直接向领导求助，说你不会。

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）

供试液制备和增菌培养　取供试品，照非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法（通则1105）制成1∶10供试液。取相当于1g、1ml、1贴或10cm2供试品的供试液，接种至适宜体积（经方法适用性试验确定的）的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，30～35℃培养18～24小时。

选择和分离培养　取上述培养物划线接种于溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时。

取上述平板上生长的菌落进行氧化酶试验，或采用其他适宜方法进一步鉴定。

请问这个就是具体操作方法吗，如果有菌落生长我就需要进一步鉴定

18913555243

说白了，控制菌检查就是对控制菌的鉴定。一般就是按下面的几项测试，检验液与菌液对照着做。
金黄色蕾萄球菌检查操作：使用洗脱液
4.1增菌：取1:10稀释的样品10ml接种到90ml SCDLP液体培养基中(如无此培养基也可用7.5%氯化钠肉汤),置37℃培养箱，培养24h。
注；如无此培养基也可用7.5%氯化钠肉汤，检验含防腐剂的化妆品时，可在1000ml此培养基中加1g卵磷脂、7g吐温80。
4.2分离：自上述增菌培养液中，取1~2接种环，划线接种在Baird Parker氏培养基，如无此培养基也可划线接种到血琼脂平板，置37℃培养24～48h。在血琼脂平板上菌落呈金黄色，大而突起，圆形，不透明，表面光滑，周围有溶血圈。在Baird Parker氏培养基上为圆形，光滑，凸起，湿润，直径为2～3mm, 颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明带。用接种针接触菌落似有奶油树胶的软度。偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落，但无混浊带及透明带。挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置37℃培养24h。
4.3  染色镜检：挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽胞，无夹膜，致病性葡萄球菌，菌体较小，直径约为0.5~1 μm。
4.4  甘露醇发酵试验：取上述分纯菌落接种到甘露醇发酵培养基中，置37℃培养24h, 金黄色葡萄球菌应能发酵甘露醇产酸。
4.5 血浆凝固酶试验
4.5.1玻片法：取清洁干燥载玻片，一端滴加一滴灭菌生理盐水，另一端滴加一滴血浆，用接种环挑取待检菌落，分别在生理盐水及血浆中充分研磨混合。血浆与菌苔混悬液在5min内出现团块或颗粒状凝块时，而盐水滴仍呈均匀混浊无凝固现象者为阳性，如两者均无凝固现象则为阴性。凡玻片试验呈阴性反应或盐水滴与血浆滴均有凝固现象，再进行试管凝固酶试验。
4.5.2 试管法：吸取1:4新鲜血浆0. 5 ml, 放入灭菌小试管中，再加入待检菌24h肉汤培养物 0.5ml。 混匀，放37℃温箱或水浴中，每半小时观察一次，24h之内如呈现凝块即为阳性。同时以已知血浆凝固酶阳性和阴性菌株肉汤培养物及肉汤培养基各0.5ml,分别加入灭菌小试管内0.5ml1:4血浆混匀，做为对照。
铜绿假单胞菌检查：使用洗脱液
4.1 增菌培养：取1:10样品稀释液10ml加到90ml SCDLP液体培养基中，置37℃培养18~24h,如有绿脓杆菌生长，培养液表面多有一层薄菌膜，培养液常呈黄绿色或蓝绿色。
注：如无SCDLP液体培养基时，可用普通肉汤培养基。检验含防腐剂的化妆品时，在每1000ml普通肉汤中加18卵磷脂、7g吐温80。
4.2 分离培养；从培养液的薄菌膜处挑取培养物，划线接种在十六烧三甲基溴化铵琼脂平板上，置37℃培养18~24h。凡绿脓杆菌在此培养基上，其菌落扁平无定型，向周边扩散或略有蔓延，表面湿润，菌落呈灰白色，菌落周围培养基常扩散有水溶性色素，此培养基选择性强，大肠艾希氏菌不能生长，革兰氏阳性菌生长较差。
在缺乏十六烷三甲基溴化铵琼脂时也可用乙酰胺培养基进行分离，将菌液划线接种于平皿中，放37℃培养24h,绿脓杆菌在此培养基上生长良好，菌落扁平，边缘不整，菌落周围培养基略带粉红色，其他菌不生长。
4.3 染色镜检：挑取可疑的菌落，涂片，革兰氏染色，镜检为革兰氏阴性者应进行氧化酶试验。
4.4 氧化酶试验：取一小块洁净的白色滤纸片放在灭菌平皿内，用无菌玻璃棒挑取绿脓杆菌可疑菌落涂在滤纸片上，然后在其上滴加一滴新配制的1%二甲基对苯二胺试液，在15~30s之内，出现粉红色或紫红色时，为氧化酶试验阳性，若培养物不变色，氧化酶试验阴性。
4.5 绿脓菌素试验：取可疑菌落2~3个，分别接种在绿脓菌素测定用培养基上，置37℃培养24h, 加入氯仿3~5ml, 充分振荡使培养物中的绿脓菌素溶解于氧仿液内，待氯仿提取液呈蓝色时，用吸管将氯仿移到另一试管中并加入1N的盐酸1ml左右，振荡后，静置片刻。如上层盐酸液内出现粉红色到紫红色时为阳性，表示被检物中有绿脓菌素存在。
4.6 硝酸盐还原产气试验；挑取被检的纯培养物，接种在硝酸盐胨水培养基中，置37℃培养24h,观察结果。凡在硝酸盐胨水培养基内的小倒管中有气体者，即为阳性，表明该菌能还原硝酸盐，并将亚硝酸盐分解产生氮气。
4.7 明胶液化试验，取绿脓杆菌可疑菌落的纯培养物，穿刺接种在明胶培养基内，置37℃培养24h,取出放冰箱10~30min, 如仍呈溶解状时即为明胶液化试验阳性，如凝固不溶者为阴性。
4.8 42℃生长试验：挑取纯培养物，接种在普通琼脂斜面培养基上，放在41~42℃培养箱中，培养24~48h,绿脓杆菌能生长，为阳性，面近似的荧光假单胞菌则不能生长。

吐司

18913555243 发表于 2026-1-13 14:56
说白了，控制菌检查就是对控制菌的鉴定。一般就是按下面的几项测试，检验液与菌液对照着做。
金黄色蕾萄球 ...

非常感谢大佬解答!感谢！

happyopi

15979 附录B

珈蓝

先做方法，然后写在SOP里，最后日常检测


你们公司让不具备这个经验的你来负责这个事情，这。。。。

机智鼠

针对您公司非无菌产品中不允许存在金黄色葡萄球菌（金葡）和铜绿假单胞菌的控制，首先需要明确药典中的相关指导原则。根据《中国药典》2020年版四部通则1105“微生物限度检查法”规定，对于非无菌药品，需进行微生物限度检查以确定是否存在特定控制菌种。

具体操作步骤如下：

1. **样品准备**：取适量的代表性样品，确保取样过程符合无菌操作要求。
2. **培养基选择**：使用适宜的培养基进行培养，如营养琼脂平板等，用于检测目标微生物。
3. **接种与培养**：将样品均匀涂布于培养基上，在适当的温度下培养一定时间（通常为24-48小时）。
4. **结果判定**：观察培养后的培养基上是否有目标微生物的生长迹象。若发现有目标微生物生长，则需要进一步确认其是否为金葡或铜绿假单胞菌。

需要注意的是，在整个过程中应严格遵守实验室安全和个人防护措施，避免交叉污染的发生。此外，建议定期参加相关培训课程或研讨会，以提升专业技能和理论知识水平。

以上内容仅供参考，请结合实际情况灵活调整，并咨询专业人士的意见。

【鼠鼠还在学习中，内容仅供参考（药搭GMP软件提供技术支持）】