细菌内毒素方法和限值计算

秦无醉 · 发表于 2011-12-11 23:27:51

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细菌内毒素方法和限值计算

审评三部

影响细菌内毒素检查结果的因素较多，一般包括：
试剂因素（鲎试剂、内毒素标准品）；
样品因素（pH值、温度、离子强度、浓度、可发生鲎试剂反应的非内毒素杂质）；
实验因素（试验器皿、细菌内毒素检查用水、鲎试剂的抗干扰能力）。中国药典要求在实验前必须对试验器皿进行处理、复核鲎试剂灵敏度、考察供试品干扰试验等，以排除上述干扰，避免假性试验结果。上述试验实际上是方法学验证过程，以保证该方法的准确性和可信性。
方法确定之后，就需要根据品种用法用量等具体情况测算细菌内毒素限值。内毒素限值指单位药物（制剂）所含内毒素的最大浓度，中国药典2000年版和2005年版均采用公式L=K/M计算。其中K指注射途径内毒素致家兔发热阈剂量，或病人无任何不良反应的内毒素阈剂量，实际计算时为5EU/kg。M一般可以理解为每公斤体重1小时内给予药物的最大量（药物用量或输液体积）。对于静脉滴注制剂，通常采用1小时内输注的剂量，对于皮下肌肉或静脉注射，一般采用单次剂量计算。例如注射用头孢哌酮钠，其临床单次使用最大量为2g，按60kg、每小时所折算的限度应为0.15EU/mg。在实际操作过程中，根据惯例或者提高药品质量的要求，一般各国药典均在上述计算最高限度基础之上将限度要求提高2-3倍，如中国药典2005年版注射用头孢哌酮钠的细菌内毒素限值即为0.05EU/mg。
以上是细菌内毒素方法和限值计算的简要介绍。细菌内毒素检查方法逐渐取代了热原检查法的地位，这体现了细菌内毒素检查方法本身的优越性，但部分申报资料中也或多或少存在一定问题，如：仅仅按照中国药典要求对该项进行检查，忽视了对方法学的验证，试验结果可信度低；另外由于不同厂商生产的鲎试剂其生产工艺、配方、质量参数等存在一定的差异，鲎试剂其抗干扰能力存在差别，但申请人忽视了对鲎试剂的选择，或对鲎试剂灵敏度的考察。在实验过程中未考察供试液浓度、pH值的影响，未进行干扰性试验等致使出现假阴性和假阳性试验结果；部分申请人未结合药物具体的临床用量，设置的细菌内毒素限值要求偏低，无法满足安全性要求；稳定性考察过程中，不注意选取安全性指标如细菌内毒素项目在最后时间点进行考察，不能对制剂的生物学稳定性有充分的把握；因此我们建议申请人在后续品种的研发和申报过程中，能够不断规范对细菌内毒素的研究工作。

大呆子 · 发表于 2011-12-12 09:32:24

这个值得学习

boheli1204 · 发表于 2011-12-12 09:47:53

学习学习

冰城 · 发表于 2011-12-12 10:46:22

学习学习，湛江那家不错

835546397 · 发表于 2011-12-12 11:03:21

这个值得学习参考

qinchangc · 发表于 2011-12-13 22:36:52

学习，谢谢分享

咕咕 · 发表于 2011-12-13 23:06:15

学习了，前段时间差点搞出笑话。

gxmyzjy · 发表于 2011-12-30 10:46:55

学习一下，谢谢

hupulang · 发表于 2012-1-3 15:05:16

请教一个问题：如果样品本身具有拮抗内毒素的疗效，检测细菌内毒素还有意义吗？如何进行方法学验证呢？

安之患 · 发表于 2014-8-27 09:27:22

575231000 发表于 2011-12-12 10:46
学习学习，湛江那家不错

湛江安度斯生物公司

yunxuan09071 · 发表于 2014-10-28 11:27:42

感谢楼主分享

刘小猫 · 发表于 2017-6-15 13:55:35

谢谢楼主分享

水木华年007 · 发表于 2021-6-25 16:32:50

谢谢楼主的分享受教了

阿金1 · 发表于 2022-5-27 10:56:44

您好，请教一个问题：关于供试品浓度，原料药研究时供试品配制的浓度，需与成品注射剂原液的浓度保持一致吗？若成品注射剂原液浓度为0.5mg/ml,原料药研究时供试品配制的浓度用的1mg/ml,这样是否可行？(采用细菌内毒素动态浊度法)

小圆球 · 发表于 2022-6-7 16:48:43

谢谢分享，学习一下

李来盛 · 发表于 2022-7-4 15:11:42

感谢分享！学习了！

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