川牛膝液相对照品跑不出峰是什么原因啊

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出现这个问题大概率是因为你第一针走完后没有回到初始梯度等平衡后进第二针。设置梯度的时候在32分钟回到10：90。平衡三两分钟。35分钟结束继续第二针就OK了

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向晚大魔王 发表于 2022-7-14 16:38
没有，检查过的

第一针结束梯度没有回到初初始梯度造成的

晓风晨曦

进样完没有平衡到初始浓度

予攸

向晚大魔王 发表于 2022-7-15 14:00
试了，一样没有

设备死体积的问题吧，想问一下后来解决了吗？

安安份份的小尘1

针对您描述的对照品色谱问题（第一针有峰，后续无峰），根据药典要求和色谱分析原理，以下是系统性排查步骤和解决方案：

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一、优先排查仪器故障（80%问题根源）

1. 进样系统问题

【表格】
可能原因        验证方法        解决方案       
进样针堵塞/漏液        观察进样针是否有液滴残留        ① 执行进样针清洗程序② 更换进样针密封垫       
进样阀切换异常        手动转动进样阀听“咔哒”声        重启仪器或联系工程师检修阀门       
样品瓶垫穿刺失效        更换新瓶垫测试        降低进样针穿刺深度或更换瓶垫材质

2. 流动相/色谱柱问题

   流动相脱气不足：产生气泡堵塞流路 →超声波脱气30分钟+在线脱气机开启

   色谱柱塌陷：第一针压力骤升，后续压力归零 →更换新色谱柱测试

   柱温箱异常：实际温度偏离设定值 →用独立温度计校准腔体温度

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二、样品与溶剂问题（15%概率）

1. 对照品降解验证

graph LR
    A[取对照品母液] --> B[室温放置2小时]
    B --> C[重新进样]
    C --> D{是否出峰？}
    D -->|是| E[排除降解]
    D -->|否| F[重新配制避光冷藏]

2. 溶剂兼容性测试

【表格】
溶剂类型        风险        替代方案       
强酸/强碱溶液        腐蚀进样阀流路        更换为甲醇-水或乙腈-水体系       
高盐缓冲液        结晶堵塞针孔        进样后用5%甲醇冲洗针路       
含不挥发添加剂        污染检测池        超滤膜过滤(0.22μm)

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三、方法参数核验（药典关键点）

  1. 梯度洗脱程序错误

       检查第二针是否遗漏梯度初始化（如未设置“柱平衡”步骤）

       药典要求：梯度后需≥5倍柱体积平衡（例：250mm柱需10ml平衡液）

  2. 检测器设置异常

       确认波长未被意外修改（如第一针270nm，后续变为360nm）

       UV检测器：检查氘灯能量（>800小时需更换）

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四、紧急处理与记录规范

操作流程

graph TB
    S[开始] --> I1[重启仪器+冲洗流路]
    I1 --> I2{是否恢复？}
    I2 -->|是| R[重新进样]
    I2 -->|否| T[更换新配对照品]
    T --> I3{是否出峰？}
    I3 -->|是| D[记录为溶剂/降解问题]
    I3 -->|否| E[测试系统适用性溶液]
    E --> F[联系工程师检修]

记录要求（GMP合规）



必须在原始记录中注明：

     第一针色谱图及积分数据

     后续无峰的基线图谱

     采取的所有排查措施

（避免被质疑数据完整性）

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五、预防措施

  1. 每日维护

       进样前执行：5倍柱体积冲洗（流速0.2ml/min）

  2. 对照品管理

       现用现配（水溶液冷藏≤24小时）

       开瓶后氮气保护密封

  3. 系统适用性

       每批样品前注入系统适用性溶液（如甲苯/萘混合标样）



重要提醒：若多次排查未解决，请提供以下信息进一步分析：

① 仪器型号（如Waters Alliance e2695）

② 具体色谱条件（流动相比例、流速、柱温）

③ 对照品名称及溶剂（如没食子酸+50%甲醇）