测序应用-细胞培养-冻存复苏高活率讨论与探讨

paaad

冻存挑剔细胞
起始细胞系冻存复苏挑剔细胞，免疫类，临床样本组织及免疫细胞统计，作为水试剂生产商十几年痛点问题统计统计经验分享。
细胞系冻存复苏类挑剔的有，THP-1,RAW264.7、NK92(该株还作为很多细胞库试剂验证内毒素，分化常用细胞）
难养系类包括，难养系包括，乳腺类，肝癌类，免疫悬浮类，胰岛胰腺类，神经类，干类、生殖类等系，原代实体瘤、原代血液类（临床特殊样本与要求），耐药株类，腺类，腺类神经类共存系，淋巴类、类器官培养应用
施万 造血原代，原代免疫（NK、γδ-T、PBMC）iPSC冻存液

更挑剔细胞：耐药株-其他资料需求可注明，稳转株，国内建系，生产用种子库、各类原代。特殊需求预实验国内试剂技术生产备份组请注明
1：新型无血清冻存复苏研发型企业也可讨论前沿痛点及要求科讨论与探讨。
2：建系高强度耐药株筛出：促贴壁可将细胞筛出耐药指数更高细胞，关键试剂看下我司促贴壁案例介绍。
3：复苏后碎片多问题细工详细参考

工业应用
科研常用5178Y HL-60 A549 MDCK ,二倍体工程细胞：3T3,MRC5,WI38、马利克疫苗用途、成肌细胞、Vero细胞、CHO细胞，PerC.6细胞、NSO细胞（后两株有老师应用可注明）
培养特性考虑（生长特性）
上皮类、SV40系，hTERT系、成团成片，堆叠、易成球（成球速度较快）
物种保护：畜牧育种、良种保护
延展应用：生物制药，基因工程，细胞培养，细胞工程，实验动物 重组蛋白，动物保健，基因工程，样本库，疫苗开发 生物
基因治疗的靶细胞：(一)骨髓干细胞(二)皮肤成纤维细胞(三）肝细胞(四)血管内皮细胞(五)淋巴细胞(六)骨骼肌细胞(七)肿瘤细胞

推荐-国内备份体系
试用单细胞研究
国内工业二倍体应用
测序高活率需求-建议上下实验具体步骤试剂，方法，目的需求

方案强调：
冻存前胰酶处理：关键步骤，提升活率，亦可提升转染成功率。
高质量血清：优化细胞培养环境，提升细胞存活率。
促贴壁：针对易成球细胞系，细工持续探索解决之道。

附件实战案例推广-噬斑单病毒分离（鸽子腹水）疫苗开发组较突出案例与文章发表前沿技术-无竞争

工上述产品开发目的，都是为纯国内技术，试剂建系，目前已开始肝，胰岛胰腺原代株建系合作，细工验证方式每个地区五家以上实验室，前期痛点难点讨论，可行方案后，同步验证，工厂拿走成熟方案，实验拿走文章，我们统计总结相关产品开发，并通过该合作，给药厂做些人才提前储备（每年毕业生这莫多），共享方案来自特斯拉技术共享，电车占有一席之地，要不共享，特斯拉自己需要500年，才能站住脚。

咨询生物温控相关专利，想咨询下这方面温控相关参数，
能否监测一分钟降温准确度数，能否精确到小数点后面一位，目前国内外都是小数点前一位，一度，两度，很多对冻存复苏高级文献方法可精确到小数点后一位，我们目前对冻存了解是0-负20是比较关键点，我司这个参数常年统计下，两个目的：一个是类器官原代冻存复苏，一个是给国内建系做些基础铺垫，国内一些原代头部公司也就精准到小数点前一位，通过该方法统计，开发出纯国内技术相关方法与试剂。如能合作来信标明。
数据统计内容
冻存瓶控温探针数据统计，安瓿瓶温度探针，
电解质培养前，复苏后，影响电解质检测

检测控冰技术
高级讨论相关统计中
钙含量
pH调整
贴壁不牢
停滞期
高渗
代谢产物积累
胰酶
滋养层应用
温控测量
DMSO几个参数
5.5%、来源ATCC的BT细胞冻村条件
6.7%、来源ATCC的MCF-10A细胞冻村条件
10%  、常规细胞系
全血冻存

自动化样本库-冻存复苏冗余试剂，技术方法统计讨论-细工生物
冗余冻存试剂开发持续模式，试剂+温度监控设备长期评测
主 传统技术优化，DMSO+血清
次 新品开发思路可行性：玻璃化干细胞冻存复苏应用，临床样本冻存复苏目的数据统计，玻璃化干细胞冻存复苏应用细工已做统计参考，有需要回信注明。
优化胰酶保种推荐，珍贵株推荐，自动化推荐） 优势验证时间长，细胞多。胰酶敏感细胞链接里有统计历程介绍。
上述两款产品在自动化培养细工优势，统一标准（试剂耗材)后，我司提供案例细胞，实验室阶段完成高滴度蛋白生产可观的效价后，用户详细了解冗余关键点，生产中与用户说明痛点解决理由，二倍体生产用户做到交钥匙阶段。无BUG.其他工业应用用户可讨论通点。

关于新型冻存液的三个案例讨论，
1：这个细胞RAW264.7新型冻存液冻存复苏，会有少量有长角细胞，会是冻存液成份引起的分化吗？
2： HEPG2这个细胞课题组，之前transwell常做没啥问题，新冻存液冻后半年左右后，TRANSWELL实验做不出来了，给老师建议是找到原种子，重新DMSO冻后，再看下，您要能回些后面需要统计的参数，我在统计，现在还想不出问题原理，我在多统计些。
3：原代案例是，复苏后活的细胞几乎没有，国内厂家的产品，不知进口的新型冻存液是否也是这样。
4：还有一个血清市场上很充足，建议冻存复苏活率判断血清质量种子库应用，等级一样的步骤手法，活率差别很大是不是也能判断血清质量（已经开始统计了），这个目的主要是后面想做些建系体系试剂方面的评价筛选，结合自动化培养-建系做些试剂产品开发。
5：黑色素瘤种子是否有影响


如需要细工资料，细工通过难养株。
黑点
生长慢
复苏后死细胞过多
培养中死细胞过多
转染后死细胞过多
变形修复-分化研究组，归巢，系绳，吊索研究可注明。
几点问题统计评测与冻存复苏解决问题统计，与细工方案介绍，北京用户可随时拜访预约合作方式。

paaad

真核细胞规模在热点蛋白药生产应用目的，细工分成不同模块开发与研发，从试剂体系国内现状，技术组成经验，资金情况，人才方面多重考虑，可行性，易形性等，基础研究特点几方面介绍，在细胞培养水试剂生产多年，能力有限，说的不对处，望老师谅解并指正提携。

细工注重应用方面，根据目前用户售后问题统计，结合自动化培养，说明几个应用特点，问题处理统计所得，平时细胞培养常见并放弃的案例（细工已有解决方案）：黑点、生长慢、不成瘤，污染救助，变形分化救助、转染死细胞过多，冻存复苏活率低等，每一项都可镶入到自动化培养应用。

例如
黑点问题：该项问题作为水试剂生产常会遇到的问题，大部分老师会放弃细胞，换新细胞，该问题国外很少，国内实验室多是一个因素，试剂人员技术等迁就因素汇总，我司十几年统计，目的是要建自己的系，所以需更深入了解关键因素，结合难养系（这类一超长时间培养，维持培养）这类问题就频发，换成种子库级别试剂，结合实战，问题可顺利解决（国内实验室用到种子库级别成本较高），结合自动化培养方面研发，该类问题可通过成像识别与算法结合，自动化可区分，细胞膜厚度，形态，消化快慢等，区分出不同组，分别培养，就能养出差别组，成像识别与计算机算法我们不懂，这能设计到这，现在描述简单，真验证需要资金，时间等，都是可观的难题与痛点。我们从手动加案例已能排除该类问题，如您公司研发涉及到该点，可深入讨论可行性。举例目的是前面提到的各种问题都是这个思路，因该方向属于基础中的基础，同路较少，也只能说到这里了。其他对应的问题都适合参考。

含血清细胞工厂方案，结合自身资金与能力片面性说明。
国内水试剂配套生产技术层面配套目前看还很难，所以选择含血清方案，说两个案例细胞，
科研应用，RWPE-1,293，目前成熟无血清案例应用少，配套厂家难找。
工业应用：PerC.6细胞、NSO细胞

在研中
冻存复苏-临床样本建系目的，类器官培养，自动化冻存复苏方法试剂开发，疫苗应用活细胞开发。测序目的高活率特殊要求告知目的需求等，
转染试剂方法开发：低毒性转染试剂，反复转染配套自动化转染相关开发，递送相关新技术方法开发
建系目的：从离体处理，到分离试剂开发，完全培养基开发，高产滴度蛋白。
类器官：神经类，腺类，生殖类超量，维持培养，相关细胞培养因子开发。
超量培养后：细胞内，细胞膜，细胞上清相关分泌物研发与配套自动化培养相关技术储备与产品开发。
细胞培养应用蛋白生产化妆品上游原料研发应用与相关讨论。

xqliu

学习了，谢谢提供分享。