药品检验用冻干菌种的使用

沁人绿茶.

目前中检所销售的药品检验用菌种均为冻干菌种，我们根据《中国药品检验标准操作规范》2010年版和科室日常工作中总结的经验，对冻干菌种的使用做以简单介绍。
        菌种的传代次数不得超过5代，从菌种保藏中心获得的冷冻干燥的菌种为第0代；冷冻干燥的原始菌种开启后转种，为第一代。原始菌种购得后，应由专人负责，接收菌种时应检查安瓿的数量和菌种的名称及每一支安瓿的完整性。并在相应的菌种接收登记表上记录所有关于菌种的信息。按照菌种保藏中心提供的相关资料进行菌种的保藏和复活操作。冻干菌种保藏时间通常为2~5年，无特殊要求，安瓿管一般于-20℃保存。菌种经过冷冻干燥保存后，处于休眠状态，需要2~3代恢复活力，具体操作步骤如下：
         一、冻干菌种复活
         1. 用75%的乙醇或碘伏清洗安瓿后，用砂轮在安瓿上部1/3处划痕或将安瓿管顶端封口处用火焰烧热(尽量靠近前端，加热时间不宜过长)，立即滴一滴无菌水于封口处使之破裂；用干燥的无菌纱布包裹安瓿，将安瓿掰开。
         2. 用一无菌吸管吸取适量0.5~0.8ml的液体培养基（金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、乙型副伤寒沙门菌和枯草芽孢杆菌用营养肉汤培养基；生孢梭菌用液体硫乙醇酸盐培养基；白色念珠菌、黑曲霉用液体改良马丁培养基）滴加到安瓿中，轻轻旋转安瓿并吹打，使冻干菌种和液体培养基充分混合并完全溶解。
         3. 将安瓿内的菌悬液全部吸出，转移至100ml相应的液体培养基中。
         4. 根据菌种类型在适宜的培养条件下培养，观察培养基是否浑浊。
        一般细菌培养温度30~35℃，18~24h；真菌培养温度23~28℃，3~5天。对需要特殊培养条件的细菌，如需5%~10%CO2或厌氧条件等，应分别于CO2培养箱或厌氧培养箱中培养。生孢梭菌我们一般采用液体硫乙醇酸盐培养基，并用液体石蜡隔绝空气培养。
         5. 如不浑浊，细菌应延长培养时间至7天以上，真菌应延长培养时间至14天以上，对于经培养仍未浑浊的培养基管，应按相关规定灭菌后处理。
         6. 浑浊说明菌种复活生长，在应用前确认菌种的纯度和特性。
         注意：安瓿管打开后需一次用完，不能留存。菌种操作应在无菌条件下进行，防止杂菌污染。
         菌种复苏方法图示：


二、冻干菌种复壮
          1. 取上述新鲜培养物1ml接种至100ml相应的液体培养基中。
          2. 根据菌种类型在适宜的培养条件下培养，具体可参照冻干菌种复活的相关操作。
         三、菌种确认
         菌种经过复苏、复壮后，需通过一系列的检查来确认菌种的纯度和活性。传统的鉴别方法有菌落形态、个体形态、孢子形态、生化特征等；商业的鉴别方法有API 、Vitek等。一般实验室可采取菌落形态、革兰氏染色镜检的方法对菌种进行简单的确认鉴别，具体操作步骤如下：
         1. 用无菌接种环取复壮后的培养物1白金耳，在相应的培养基平板上划线分离单个菌落，适宜条件下培养，培养后观察是否具有典型的菌落形态。此操作过程中涉及到的培养基种类的选择、培养条件及典型的菌落形态特征可参照“《中国药典》2010年版 附录 微生物限度检查法”中的有关规定。
         2. 挑取上述单个纯菌落培养物进行革兰氏染色和镜检，观察其染色特性及微生物形态学特征。
         3. 已通过确认后的菌种接种至相应培养基，进行使用或传代保藏。
来自辽宁省药检所。

xuxu6666

谢谢分享！！！

LYC

多谢分享！

天上没有月亮

问一下，复活的算第一代？复壮的就是第二代啦？

angela

谢谢分享！

shevchenkozy

买ATCC的吧  人家给的资料全 做法也全面

小小虫的麻麻

谢谢分享，很详细，正好用到

brenda84

谢谢分享，真好

ph7G3ofgDT

我买的第四代小珠珠