微生物菌液配制

mr_tang

咨询一下，菌液配制的问题。
我菌液配置好以后，浓度未知，需在培养基上培养后，才知道其浓度。但是药典规定在2-8℃，24h之内有效。刚配出来，我浓度都不知道，也没法使用。等我知道浓度的时候，那不就是3-5之后了，那不早就过期了。求支招？？？

xinghai

可以前期摸索，例如菌种复苏时接种菌液量、培养基体积以及培养时间，计数可以通过比浊、显微镜镜检、OD值进行辅助计数，同一批储备菌株如上述条件固定，一般可以知道最终菌液含量范围，稀释后直接使用，一般在范围内。我们就是这样做的。

hyhy1028

路过，抢个沙发，坐等高手解答。

幻影

。。。谁来答吧。

mr_tang

幻影 发表于 2014-8-18 16:05
。。。谁来答吧。

你最积极了，赶快请高手来解答吧。

mr_tang

hyhy1028 发表于 2014-8-18 16:05
路过，抢个沙发，坐等高手解答。

哈哈，一楼可是有奖励的哦。

君瀹

要是已知的菌种的话可以买标准的菌悬液做比浊法，可以大概确定一个范围的。不是很精确。

mr_tang

君瀹 发表于 2014-8-18 16:21
要是已知的菌种的话可以买标准的菌悬液做比浊法，可以大概确定一个范围的。不是很精确。

那还是要通过培养来确定具体的浓度。你们实际是怎么操作的呢？

君瀹

mr_tang 发表于 2014-8-18 16:25
那还是要通过培养来确定具体的浓度。你们实际是怎么操作的呢？

我们一般都是用混菌法计数的。这个一般在24H左右就能完成的，不需要三五天那么久。将菌悬液原液在2-8℃冰箱保存，菌体数量变化不大的。
还有，你说的菌悬液应该是营养肉汤培养基培养完的菌液吧？药典中的菌悬液是用稀释液稀释后的菌液，由于稀释液不适合菌生长，故限定24H内使用。

mr_tang

君瀹 发表于 2014-8-18 16:33
我们一般都是用混菌法计数的。这个一般在24H左右就能完成的，不需要三五天那么久。将菌悬液原液在2-8℃冰 ...

我是将最初的菌悬液，然后通过稀释，达到我需要的浓度。那最初的菌悬液在2-8℃，能保存多久呢？

君瀹

mr_tang 发表于 2014-8-18 16:43
我是将最初的菌悬液，然后通过稀释，达到我需要的浓度。那最初的菌悬液在2-8℃，能保存多久呢？

这个我还没验证过哎。具体的时间不太清楚。最近也没看药典了。但是你做个计数的时间是够了。
我们是每次实验都配一次菌液的。

mr_tang

君瀹 发表于 2014-8-18 16:47
这个我还没验证过哎。具体的时间不太清楚。最近也没看药典了。但是你做个计数的时间是够了。
我们是每次 ...

你讲的混菌法没搞懂。能否将这个方法的介绍复制一下，回我。感谢！

mr_tang

xinghai 发表于 2014-8-18 17:19
可以前期摸索，例如菌种复苏时接种菌液量、培养基体积以及培养时间，计数可以通过比浊、显微镜镜检、OD值进 ...

谢谢！非常棒的解答。

nf-sz

嘻嘻嘻 比浊法好使

mr_tang

nf-sz 发表于 2014-8-18 17:49
嘻嘻嘻 比浊法好使

我慢慢参悟吧。

咕咕

君瀹 发表于 2014-8-18 16:33
我们一般都是用混菌法计数的。这个一般在24H左右就能完成的，不需要三五天那么久。将菌悬液原液在2-8℃冰 ...

支持，楼主所说的最初菌悬液是不是药检所之类买回来的？

lawlypeng

菌液制备还是通过经验的累积，刚开始要确定好方法，进行平板计数，连续几次之后，基本上就可以制备出你需要的菌液浓度了。

liuchunxue

路过，学习学习

bax193532

菌液计数与培养基适用性试验同步进行，多做几个稀释度