清洁验证中使用TOC检测蛋白残留的回收率问题

隐月

对于生物制品需要使用，如果涉及到共用设备，通常使用棉签擦拭方法进行取样，因蛋白降解及检测限线原因，专属性方法已经不再适用，一般所以选择TOC方式进行蛋白残留检测，回收率研究也是必要的，在进行回收率验证时，需要将蛋白定量的涂抹的标准板材上，但所涂抹的蛋白标准品是不会独立存在的，蛋白必须保存在缓冲体系中，而缓冲体系是含碳的，而且是有机碳。在涂布时，缓冲体系和蛋白是一同涂布在表面的，那么在进行擦拭的时，擦下来的碳有可能是来自缓冲液，有可能是来自活性蛋白。但两者都含有机碳，且通常缓冲液含碳总量更大。这样导致的结果就是不能说明擦下来的碳到底来自缓冲液还是来自活性蛋白，请问对于这种情况，如何考虑？在TR49中，也没有说明这种情况。再进行擦拭回收率验证的时候，能不能做到涂布不含缓冲体系，游离的蛋白？

隐月

皇牌吐槽王 发表于 2017-12-13 18:48
生物制品这行不是低学历的人能从事的

说我学历低，你哪来的自信？你博士学位？你要真是高学历，从你回贴的专业水平看，确实是种悲哀，最喜欢在小儿科问题上大做文章，有难度的问题，连题目都看不懂，你还是算了吧，好好的做你的道德卫士吧

yuansoul

棉签 ？ 你觉得 棉花 是无机物？

肆虐的风ba

先测下缓冲液，在测该缓冲液下的样品，相减。个人想法

隐月

yuansoul 发表于 2017-12-13 18:44
棉签 ？ 你觉得 棉花 是无机物？

我们用的是TX761k，棉签自身的TOC小于50ppb，棉签如果脱落，造成样品TOC升高的数量级，更小。做清洁验证即使是化药，应该也是用的是这种棉签。

隐月

肆虐的风ba 发表于 2017-12-13 20:05
先测下缓冲液，在测该缓冲液下的样品，相减。个人想法

这确实是一种方法，我担心的的是缓冲体系的碳波动，对于回收率的准确性的影响，别人家的不清楚，我们的蛋白浓度是比较低的，按这个算法，缓冲体系的波动会一定程度上把蛋白回收率覆盖掉。这个之前我们做过，从结果看，不同人员的差距还是挺大的，一共做了两个人，一人50%，一人30%，但RSD倒是没问题。因为从清洁验证的角度很难把交叉污染的问题说明白，而且设备厂家不建议反复拆卸，后续会考虑再买一台，还是专用省心呀

huawuying

TOC检测器应该能减去缓冲液的本底的，你这是指的是做回收率的吧，你缓冲液是PBS么，蛋白也可以溶于水的吧。你实际做清洁验证测的样品是淋洗水吧，不是缓冲液吧。

隐月

huawuying 发表于 2017-12-14 08:06
TOC检测器应该能减去缓冲液的本底的，你这是指的是做回收率的吧，你缓冲液是PBS么，蛋白也可以溶于水的吧。 ...

都是有机碳，减不掉的

yuansoul

隐月 发表于 2017-12-14 07:38
我们用的是TX761k，棉签自身的TOC小于50ppb，棉签如果脱落，造成样品TOC升高的数量级，更小。做清洁验证 ...

天啊

阿炳1987

请欣赏秘术“影分身之术”

huawuying

隐月 发表于 2017-12-14 08:52
都是有机碳，减不掉的

你用PBS做空白

冷特

huawuying 发表于 2017-12-14 20:06
你用PBS做空白

做空白的话，干扰太大了

每驿必通

皇牌吐槽王 发表于 2017-12-13 18:48
生物制品这行不是低学历的人能从事的

呵呵。。。。

每驿必通

皇牌吐槽王 发表于 2018-1-21 11:27
咋？伤害到你那脆弱的自尊心了？

不会。。。