工艺上纯化用的hplc，为什么不能把杂质和主峰分开呢

尚坡

最近在接触，生物制剂的原料药生产，用hplc，进行的纯化，通过色谱图，进行接目标物质溶液，发现想要保留的物质，是一个峰的一部份，而不是全部，原以为该峰是单一物质溶液（按照实验室的液相理论），可是拿到实验室对该物质进行检测，发现里面却有很多杂质，不是单一物质，疑惑在于为什么工艺上的hplc不能把杂质和目标蛋白在细分一下，出来若干个杂质峰和目标物质峰呢，像实验室的液相一样

snow_xs

你是说工业纯化吧？工业上HPLC和质量分析的HPLC目的不一样。
工业上需要将样品拿出来，而质量上只需要看得见就行，不需要拿到样品。
工业上需饱和上样，而质量上是不饱和上样。

lszeric

可以的。你需要摸索分离条件，选择合适的分离柱，或者买更好的液相

熔岩巨人

从理论上来讲 没有问题 实际中你可以摸索下  

joshua

实验室的柱效 比纯化 的柱效高很多吧

xqliu

填料不同吧

熊小妞的葵花

柱子 柱温 流动相 仪器的灵敏度等 都有影响

飞凌大圣

制备液相和分析液相虽然原理相同，但是载药量差别巨大，峰也很宽，不能用分析型液相来评价的。
可以通过以下措施进行处理：
1、调整纯化液（流动相）的配比，使得主峰与杂质的保留时间差别更大一些。
2、根据物料的的溶解性，最大化被纯化液的浓度，尽量使被纯化液的液面厚度足够薄。
3、纯化时，纯化液的流速是多少，可以的话适当降低20-30%。
4、收集物料的时候不要收集在一个瓶子里边，可以根据流速情况，每5ml收集一个瓶子，直至出峰结束后再接5-10瓶（显示屏的出峰与物料实际流出有时间差），所有收集液放在冰箱，逐个检测，找到最纯的部分。
5、由于是生物制品，建议将纯化液、色谱柱、收集瓶等放在冰箱（2-8℃）中操作，，最好是透明展示柜，方便观察。
等找到规律之后，可以有针对性的进行收集和处理，包括药液的回收等等。

个人建议，仅供参考，如有不妥之处欢迎批评指正！

尧宁静森林

我前家公司也是做生物药的，就是分不开，连药典用的方法也是默认分不开的