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[已解决] 紧急求助:出大事了,HPLC主峰后有一个紫外光谱图一致的小峰的

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药徒
发表于 2019-3-13 11:46:52 | 显示全部楼层 |阅读模式
如题,该小峰时大时小,时有时不有,已知主成分很稳定,有没有大神懂,会不会是溶剂效应或
柱筛板塌了,关键换柱子也没用,该怎么办,头大。


色谱图

光谱图

最佳答案

验证过的方法还是在方法开发? 1、首先扎空白扎,没问题的话排除流动相、仪器、色谱柱等问题 2、同一个样连续进如果都没有(且一致),保证样品确实是稳定的 3、重新配样同一个样连续进前面有,后面没有,样品稳定性出现问题 3、重新配样同一个样连续进如果都有(且一致),那就是配置过程出现问题,回顾配置过程中的细节,包括溶剂,配置方法,看看容量瓶、进样瓶、实验过程中接触样品的容器是否污染等等 不知道你的实验具体操作参数,只能这样简单的分析
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药徒
 楼主| 发表于 4 天前 | 显示全部楼层
zfamous 发表于 2019-3-19 10:03
你说减少进样量峰就消失了,看你这个图真的不像是进样量过载,过载了应该是平头峰,或者是分叉峰。这个图 ...

据我分析,你描述的过载即出现平头峰是样品浓度大,色谱峰的响应超过了检测器显示的最大值;在我的这种情况下,主峰未出现平头峰,但后面会有小峰,依我理解是主成分与色谱柱固定相的相互作用(比如吸附)达到了饱和,导致主成分在色谱柱内产生了一段浓度梯度,导致主峰严重拖尾或出现小峰的情况,我减低了进样针的进样量就没了。

点评

zfamous  现在的液相色谱系统,至少也是工作站了,不存在响应超过检测器限值的情况。你说的这种情况是老早以前,纸带的仪器事情,还要调整灵敏度什么的。 达到饱和了,同一浓度的达到塔板上限,这一段时间的浓度一样,所以会  详情 回复 发表于 4 天前
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药徒
发表于 2019-3-14 09:26:39 | 显示全部楼层
JingleDancer 发表于 2019-3-14 08:54
谢谢诸位了,已解决,是柱容量超了,减少进样量小峰就没了

你们检测方法的进样量能够随便变的?
退一万步来说,即使允许你减小进样量,你怎么保证一些杂质随着浓度的减小而响应变小,从而变成未检出?
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药生
发表于 2019-3-13 13:32:38 | 显示全部楼层
可以从以下几点进行考虑:
1、检测方法本身是否有问题,包括流动相、色谱柱、检测波长等。
2、如果不是检测方法问题,查一下色谱柱,换个生产商(如waters、Agilent等),色谱柱不同分离性效能差别比较大。
3、你所检测的主药所谓的稳定,是通过专属性破坏试验、影响因素试验确证了吗?如果没有,就不要说这个主药是稳定的。
4、有时间换一台仪器做一下,你会发现很多有趣的结果。

呵呵,以上纯属个人意见,仅供参考!
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发表于 2019-3-13 12:15:15 | 显示全部楼层
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药徒
发表于 2019-3-13 12:30:31 | 显示全部楼层
这就是杂质啊
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药徒
发表于 2019-3-13 12:36:04 | 显示全部楼层
溶剂效应或者柱子塌陷,空白样走的出来,
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发表于 2019-3-13 13:09:11 | 显示全部楼层
进一下空白溶剂看看此位置有无峰,可以排除溶剂峰
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药徒
发表于 2019-3-13 14:38:11 | 显示全部楼层
验证过的方法还是在方法开发?
1、首先扎空白扎,没问题的话排除流动相、仪器、色谱柱等问题
2、同一个样连续进如果都没有(且一致),保证样品确实是稳定的
3、重新配样同一个样连续进前面有,后面没有,样品稳定性出现问题
3、重新配样同一个样连续进如果都有(且一致),那就是配置过程出现问题,回顾配置过程中的细节,包括溶剂,配置方法,看看容量瓶、进样瓶、实验过程中接触样品的容器是否污染等等
不知道你的实验具体操作参数,只能这样简单的分析
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药徒
发表于 2019-3-13 16:48:38 | 显示全部楼层
这个峰好傲娇啊
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药徒
发表于 2019-3-13 17:11:13 | 显示全部楼层
明显是一个杂质峰
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药徒
 楼主| 发表于 2019-3-14 08:54:22 | 显示全部楼层
飞凌大圣 发表于 2019-3-13 13:32
可以从以下几点进行考虑:
1、检测方法本身是否有问题,包括流动相、色谱柱、检测波长等。
2、如果不是检 ...

谢谢诸位了,已解决,是柱容量超了,减少进样量小峰就没了

点评

可亲可爱  就是的,怎么说改就改啊?当初方法验证是怎么做啊?  详情 回复 发表于 2019-3-14 11:09
Doitasyoulike  你们检测方法的进样量能够随便变的? 退一万步来说,即使允许你减小进样量,你怎么保证一些杂质随着浓度的减小而响应变小,从而变成未检出?  详情 回复 发表于 2019-3-14 09:26
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发表于 2019-3-14 09:43:06 | 显示全部楼层
JingleDancer 发表于 2019-3-14 08:54
谢谢诸位了,已解决,是柱容量超了,减少进样量小峰就没了

学习了,谢谢分享
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药徒
发表于 2019-3-14 10:14:31 | 显示全部楼层
考虑一下异构体,另外溶液稳定性要做,可能是降解产物干扰,排除完方法然后就是机器和色谱柱的问题了
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药徒
发表于 2019-3-14 11:09:35 | 显示全部楼层
JingleDancer 发表于 2019-3-14 08:54
谢谢诸位了,已解决,是柱容量超了,减少进样量小峰就没了

就是的,怎么说改就改啊?当初方法验证是怎么做啊?
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药徒
 楼主| 发表于 2019-3-14 17:00:26 | 显示全部楼层
本帖最后由 JingleDancer 于 2019-3-14 17:01 编辑
Doitasyoulike 发表于 2019-3-14 09:26
你们检测方法的进样量能够随便变的?
退一万步来说,即使允许你减小进样量,你怎么保证一些杂质随着浓度 ...

亲,补充如下:我们目前是方法开发阶段,可以改变色谱条件,至于杂质响应的话,我们会看杂质信噪比的,就上文中的小峰,峰面积占主峰约6%,响应相当高了,减少进样量,小峰完全消失,可不是因为响应低未检出。

点评

zfamous  你说减少进样量峰就消失了,看你这个图真的不像是进样量过载,过载了应该是平头峰,或者是分叉峰。这个图里两个峰顶的浓度差的有点多,看起来还是更像因为溶剂效应导致的。 进样量减少了多少,之前进样量是多少?  详情 回复 发表于 4 天前
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药徒
 楼主| 发表于 2019-3-14 17:02:34 | 显示全部楼层
可亲可爱 发表于 2019-3-14 11:09
就是的,怎么说改就改啊?当初方法验证是怎么做啊?

哈,方法开发中,尚未验证
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药徒
发表于 2019-3-15 13:44:40 | 显示全部楼层
看到出大事才进来的,结果就这事。
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药徒
发表于 6 天前 | 显示全部楼层
用刀把它刮掉,画线修平,OK收工
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药徒
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
JingleDancer 发表于 2019-3-14 17:00
亲,补充如下:我们目前是方法开发阶段,可以改变色谱条件,至于杂质响应的话,我们会看杂质信噪比的,就 ...

你说减少进样量峰就消失了,看你这个图真的不像是进样量过载,过载了应该是平头峰,或者是分叉峰。这个图里两个峰顶的浓度差的有点多,看起来还是更像因为溶剂效应导致的。
进样量减少了多少,之前进样量是多少?
降低进样量,对于溶剂效应里,流动相与样品稀释剂溶解性差的不那么多,也会好转。
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药徒
发表于 4 天前 | 显示全部楼层
过载还有这样的问题啊,进样量减少了多少?是降低浓度还是减少进样体积?
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