求助：液相梯度洗脱基线漂移

·青黛

梯度洗脱基线漂移，做的川牛膝，仪器是岛津的LC-20AT，以甲醇为流动相A，以水为流动相B，梯度洗脱；检测波长为243nm。
-----------------------------------时间（分钟） 流动相A（％） 流动相B（％） -----------------------------------0~5                          10                    90
5~15                     10→37           90→63
15~30                       37                   63
30~31                   37→100          63→0

跑空针基线也漂移的很厉害，请问有什么解决办法？

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歪说歪有李

首先：这是一个系统性问题，一两句话说不清楚；建议补充提供泵型号、柱型号。

建议：连续三次空梯度测试，其中第三次进样流动相；查看三个空梯度是否重叠；之后对比空梯度和标准品梯度中梯度变化点差异，没有明显差异则影响不会太大；毕竟梯度的基线不同于等度。

第二：观察到3分钟、2分钟有梯度变换出现的馒头小峰，考虑到甲醇-水体系的吸收度变化，基线上漂符合客观规律；但应注意梯度的稳定性，这个受制于你的梯度形式（貌似未见岛津的梯度控制方式支持不同梯度曲线），所以沙发的意见也可以尝试一下，若你有机器的话。

第三：不同仪器的梯度实现方式是不一样的，请查阅申报资料：比如低压梯度（比例阀）、高压梯度（双泵线速变化）产生的基线峰形不太一样，个人习惯：梯度实验更喜欢高压梯度。

第四：鉴于仪器没有背压监测功能，你需要记录等度和梯度阶段的背景压力变化，对比三针空基线的压力是否有差异，考虑系统的密封性。

第五：其它系统的问题，如检测器等需要咨询工程师（但通常这是最小的可能性。）

BVB0911

换台机子试试

枫飞沙

方法是否验证过呢，如果它原本就是这样的基线呢

·青黛

BVB0911 发表于 2020-04-17 08:22
换台机子试试

只有这一台双泵。

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·青黛

vabs（李） 发表于 2020-04-17 08:53
首先：这是一个系统性问题，一两句话说不清楚；建议补充提供泵型号、柱型号。

建议：连续三次空梯度测试，其中第三次进样流动相；查看三个空梯度是否重叠；之后对比空梯度和标准品梯度中梯度变化点差异，没有明显差异则影响不会太大；毕竟梯度的基线不同于等度。

第二：观察到3分钟、2分钟有梯度变换出现的馒头小峰，考虑到甲醇-水体系的吸收度变化，基线上漂符合客观规律；但应注意梯度的稳定性，这个受制于你的梯度形式（貌似未见岛津的梯度控制方式支持不同梯度曲线），所以沙发的意见也可以尝试一下，若你有机器的话。

第三：不同仪器的梯度实现方式是不一样的，请查阅申报资料：比如低压梯度（比例阀）、高压梯度（双泵线速变化）产生的基线峰形不太一样，个人习惯：梯度实验更喜欢高压梯度。

第四：鉴于仪器没有背压监测功能，你需要记录等度和梯度阶段的背景压力变化，对比三针空基线的压力是否有差异，考虑系统的密封性。

第五：其它系统的问题，如检测器等需要咨询工程师（但通常这是最小的可能性。）

好的，谢谢，我先试试，有问题再请教。

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BVB0911

·青黛 发表于 2020-4-17 10:44
只有这一台双泵。

你柱子有问题，换根柱子试试

本草之光辉

可以按vabs（李）版主的意思，一个个原因去排查。

也可以考虑一下流动相是否污染了