蒲公英 - 制药技术的传播者 GMP理论的实践者

 找回密码
 立即注册

QQ登录

只需一步,快速开始

使用微信帐号登录

使用微信帐号登录

搜索
查看: 515|回复: 19
收起左侧

[疑难问题] 纯化水微生物限度取10ml,还加稀释液吗

[复制链接]
发表于 2020-11-19 13:26:36 | 显示全部楼层 |阅读模式

欢迎您注册蒲公英

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?立即注册

x
药典规定,纯化水只需要测大于1毫升就行,我取10毫升直接过膜(之前膜已经用pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液润湿并灭菌),再用50毫升pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液冲洗膜,为什么要冲洗膜呢;
有的方法是纯化水加无菌水稀释一下取10毫升测定,这个是为什么呢?
回复

使用道具 举报

药徒
发表于 2020-11-19 14:08:31 | 显示全部楼层
纯化水微生物限度是取本品不少于1ml,标准是1ml供试品中需氧菌总数不得过100cfu。实际操作过程中取1ml供试品加入100ml灭菌的缓冲液中,过滤,取滤膜菌面朝上贴于R2A培养基。若没有长菌,报告小于1就行了,取10ml过滤的用意是什么呢?长多了还没办法数。至于冲洗是因为培养的是过滤膜,为了把管路和过滤器壁上的微生物集中到膜上。
回复 支持 1 反对 0

使用道具 举报

药师
发表于 2020-11-19 13:39:13 | 显示全部楼层
过滤量太小,所以要冲洗或稀释
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2020-11-19 13:55:37 | 显示全部楼层
请问,微孔滤膜怎么灭菌
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2020-11-19 14:01:01 | 显示全部楼层
缓冲液和冲洗液都是一种溶液么,公司里有无菌氯化钠,也可以用吧
回复 支持 反对

使用道具 举报

 楼主| 发表于 2020-11-19 14:08:57 来自手机 | 显示全部楼层
李会玲 发表于 2020-11-19 13:55
请问,微孔滤膜怎么灭菌

微孔滤膜跟着抽滤那个头一块灭菌,按厂家说的做的
回复 支持 反对

使用道具 举报

 楼主| 发表于 2020-11-19 14:10:44 来自手机 | 显示全部楼层
李会玲 发表于 2020-11-19 14:01
缓冲液和冲洗液都是一种溶液么,公司里有无菌氯化钠,也可以用吧

我看也有用无菌生理盐水作为冲洗液的
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2020-11-19 14:13:27 | 显示全部楼层
jiazhang33 发表于 2020-11-19 14:08
微孔滤膜跟着抽滤那个头一块灭菌,按厂家说的做的

用的是三联滤杯,买的上海新亚微孔滤膜散装的,找不到厂家,三联滤杯那么长,直接放高压锅么?
回复 支持 反对

使用道具 举报

 楼主| 发表于 2020-11-19 14:16:44 来自手机 | 显示全部楼层
james175cm 发表于 2020-11-19 14:08
纯化水微生物限度是取本品不少于1ml,标准是1ml供试品中需氧菌总数不得过100cfu。实际操作过程中取1ml供试品加入100ml灭菌的缓冲液中,过滤,取滤膜菌面朝上贴于R2A培养基。若没有长菌,报告小于1就行了,取10ml过滤的用意是什么呢?长多了还没办法数。至于冲洗是因为培养的是过滤膜,为了把管路和过滤器壁上的微生物集中到膜上。

看完您的回复我明白点了,我取10毫升做出来这样的,肯定要重新换方法做实验了,但是这个看膜哪面呢?看与培养基贴合那面(也就是从平皿底部看)还是看背对培养基那面(从平皿上盖)看?
回复 支持 反对

使用道具 举报

 楼主| 发表于 2020-11-19 14:19:11 来自手机 | 显示全部楼层
李会玲 发表于 2020-11-19 14:13
用的是三联滤杯,买的上海新亚微孔滤膜散装的,找不到厂家,三联滤杯那么长,直接放高压锅么?

我用的这种很短,厂家说121度湿热灭菌
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2020-11-19 14:38:34 | 显示全部楼层
“取纯化水20ml,用薄膜过滤法过滤,减压抽干,取出滤膜,将滤膜放入制备好的R2A培养基平板上,在30-35度培养不少于五天,计数。
阴性对照:取20ml已灭菌的纯化水按供试品同法处理,作为阴性对照。”
这是之前工作的小姐姐留下来的步骤,我有好多疑问
1.三联滤杯配了高温枪,可以灭菌,但是新亚的微孔滤膜怎么灭菌
2.步骤里没说缓冲液,冲洗液的事,我在网上查了可能需要,但是具体怎么做,多少量还是不知道
3.三联滤杯的杯子是敞口的,我在倒的过程不是又接触了空气么,那不就可能染菌了么
4.我看楼主是10ml,都不可计数,那我20ml,没冲洗,没缓冲,就更不计数了。
5.阴性对照里,灭菌的纯化水,那我从车间里取完的纯化水该怎么灭菌,高压灭菌锅么
现在实验室就我一个实习生,找不到前辈请教,谢谢各位帮帮忙。
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2020-11-19 14:58:40 | 显示全部楼层
当然是看正面啊
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2020-11-19 16:46:46 | 显示全部楼层
jiazhang33 发表于 2020-11-19 14:16
看完您的回复我明白点了,我取10毫升做出来这样的,肯定要重新换方法做实验了,但是这个看膜哪面呢?看与 ...

是菌面朝上贴在培养基上,当然是长在膜表面,微生物又不会跑到膜背面去,不要以为没有和培养基接触,之所以叫膜微生物是可以通过膜吸收营养的。我发现你好可爱。
你这个培养的时间挺长了吧,已经连成片了,不好计数了。初略数了下有80以上了,按我说的方法做就好了。
回复 支持 反对

使用道具 举报

 楼主| 发表于 2020-11-19 16:51:12 | 显示全部楼层
james175cm 发表于 2020-11-19 16:46
是菌面朝上贴在培养基上,当然是长在膜表面,微生物又不会跑到膜背面去,不要以为没有和培养基接触,之所 ...

好的,专业人士能数到80以上,我看不出来什么
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2020-11-19 17:02:03 | 显示全部楼层
李会玲 发表于 2020-11-19 14:13
用的是三联滤杯,买的上海新亚微孔滤膜散装的,找不到厂家,三联滤杯那么长,直接放高压锅么?

微生物限度为什么要用三联滤杯,介绍你看一下温州维科的微生物限度仪,包括反复使用集菌培养器,滤膜,如何灭菌等等,厂家还是算比较专业的。
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2020-11-19 17:59:50 | 显示全部楼层
用过一次性集菌培养器,挺好用的,也买过抽率装置,几万一台,一次做6个,基本全自动。还看过食品还是药品法规官网里的直接灼烧灭菌。然后,按药品要求是用缓冲液,但我上学时就是无菌生理盐水,保证细胞膜不破就行
回复 支持 反对

使用道具 举报

药徒
发表于 2020-11-20 09:08:59 | 显示全部楼层
主要看以下要点是如何做的,还是需要准也机构培训一下
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2020-11-20 09:09:06 | 显示全部楼层
李会玲 发表于 2020-11-19 13:55
请问,微孔滤膜怎么灭菌

滤头和过滤膜湿热灭菌
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2020-11-20 09:11:19 | 显示全部楼层
jiazhang33 发表于 2020-11-19 14:16
看完您的回复我明白点了,我取10毫升做出来这样的,肯定要重新换方法做实验了,但是这个看膜哪面呢?看与 ...

看正面进行计数,反正看到啥
回复 支持 反对

使用道具 举报

发表于 2020-11-20 13:22:35 | 显示全部楼层
李会玲 发表于 2020-11-19 13:55
请问,微孔滤膜怎么灭菌

可以买已灭菌的滤膜,用起来方便
回复 支持 反对

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则

×友情提示
1、无权下载附件会员可能原因:1.“待验证用户组“,请点击注册邮箱里面收到的确认邮件即可; 2.作者设定权限的,提高用户组级别即可
2、对本站的任何疑问或合作需求,请联系微信tank066,关于怎样提高用户组/积分:https://www.ouryao.com/thread-6764-1-1.html
3、注册用户在本社区发表、转载的任何作品仅代表其个人观点,不代表本社区认同其观点。
4、如果存在违反国家相关法律、法规、条例的行为,我们有权在不经作者准许的情况下删除其在本论坛所发表的文章。
5、所有网友不要盗用有明确版权要求的作品,转贴请注明来源,否则文责自负。

QQ|小黑屋|手机版|蒲公英|ouryao|蒲公英 ( (京)-非经营性-2014-0058 京ICP备14042168号 京ICP证150354号 )

GMT+8, 2020-12-5 10:05 , Processed in 0.085258 second(s), 70 queries .

Powered by Discuz! X3.4运维支持:苏州豚鼠科技有限公司

Copyright © 2001-2020, Tencent Cloud.

快速回复 返回顶部 返回列表