制药用水对微生物限度和细菌内毒素的要求有哪些？

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在制药行业，一些微生物比如革兰阴性菌容易形成生物膜并成为内毒素的污染源，对制药用水系统造成严重危害。根据中国药典2020 版要求，纯化水中微生物指标需氧菌总数≤100CFU/mL，注射用水微生物指标需氧菌总数≤10CFU/100mL，这并非是判断水系统合格或者不合格的标准，但系统制水以此作为警戒限量，从而确保制药用水系统能够在控制的状态下运行。

那么，警戒限量由什么来决定呢？通常企业必须对企业生产的产品及生产方法进行评估，根据系统的制水情况、企业的生产工艺以及产品用途来确定警戒限量。在充分考虑最容易对水系统造成危害的品种的条件下合理设置系统可接受的企业内控微生物限度，同时，企业内控微生物限度必须在药典规定的警戒限量范围内。若超过该限量，企业必须调查原因，采取有效措施进行整改并做好记录。

通常，制药用水系统中微生物有两种存在形式：其一是浮游在水中，其二是附着在罐壁及管壁上。当微生物附着在罐壁或者管壁时，会形成生物膜。生物膜能够持续脱落生物菌，使得系统污染分布不均匀，如此一来，取样检测的样品就很有可能不能代表系统污染的菌型和数量。比如，某企业在微生物检测时，一个样品的细菌数为8CFU/100mL，而另一个样品的细菌数为800CFU/mL，不能以其中一个样品的细菌数作为整体检测结果。因此，在微生物检测时，不仅仅是对某一个菌落进行鉴别，而检测对象应当为细菌总数测试中发现的菌落。

图一　净得瑞纯化水设备

注射用水应尽可能无菌，但实际上水样采集并非在无菌地区进行，容易造成误差使得偶尔有少量的菌数。另外，注射用水最关注指标为内毒素，根据药典2020版要求，细菌内毒素≤0.25EU/mL。

目前，制药用水系统微生物指标和内毒素指标测试多采用离线取样的方式，利用鲎试剂进行检测分析。该检测方式具有简单、高效、灵敏、准确的优点，是国际上非常认可并广泛使用的内毒素检测方式。