蒲公英 - 制药技术的传播者 GMP理论的实践者

搜索
查看: 1022|回复: 1
收起左侧

分享:测量梯度方法的驻留体积

[复制链接]
药仙
发表于 2020-12-28 19:12:19 | 显示全部楼层 |阅读模式

欢迎您注册蒲公英

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?立即注册

x
测量梯度方法的驻留体积
驻留体积是梯度形成点和色谱柱入口之间系统的总体积。请在“方法转换计算器”中为以下系统指定驻留值:
  • 运行原始方法的系统
  • 即将运行目标方法的系统
请通过以下步骤测量驻留体积,如果要采用其它方案,则必须使用该方案测定原始和目标系统的驻留体积。
要求:必须使用相同的测量技术来获取原始和目标驻留体积。
必备材料
  • LC/MS 级水
  • 手套:干净、没有粉尘、耐化学物质
  • 紫外检测器,例如 TUV 或 UV-Vis 2489
  • 毛细管限流器
  • 咖啡因
要计算驻留体积:
  • 如有必要,请在系统中添加紫外检测器。
  • 使用毛细管限流器替换色谱柱。
重要说明:选择的限流措施需将最小反压保持在 13,790 kPa(137,895 mbar,2000 psi)。
  • 准备 100% 的 LC/MS 级水作为“溶剂 A”,含 10 mg/L 咖啡因的 100% LC/MS 级水作为“溶剂 B”。
  • 按照如下所示指定溶剂管理器梯度:
    时间 (min)
    流速 (mL/min)
    %A
    %B

    初始
    1.00
    100
    0

    5
    1.00
    100
    0

    25
    1.00
    0
    100

    30
    1.00
    0
    100

  • 指定采集吸光度数据的通道,包括溶剂组分 %B 的曲线。
  • 将紫外检测器波长设置为 273 nm。
  • 运行方法。
  • 在色谱中,请执行以下操作:
  • 确定实验 t1/2 — 吸光度曲线达到 100% B 对应吸光度值 50% 时的绝对时间。
  • 确定设定的 t1/2 — 设定的梯度达到 50% 时的绝对时间。对于指定的梯度,该时间为 15 min。
在下方的示例色谱中,溶剂组分 %B 的设定梯度为黑色曲线,实验曲线为红色。
显示驻留时间的示例色谱
[img][/img]
  • 计算驻留体积相关的时间,方法如下:
tD = t½ 实验 - t½ 设定
  • 计算驻留体积,方法如下:
VD = tD × F,其中:
F = 流速 (mL/min)
其它信息资源: Dolan John W. Gradient Elution, Part IVwell-Volume Problems.LCGC North America [Internet].2013 Jun 1. [cited 2015 Dec];31(6).获取链接:http://www.chromatographyonline.com/gradient-elution-part-iv-dwell-volume-problems-0


以上摘取自waters色谱柱计算器帮助文件

回复

使用道具 举报

药士
发表于 2020-12-29 11:21:46 | 显示全部楼层
回复

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则

×发帖声明
1、本站为技术交流论坛,发帖的内容具有互动属性。您在本站发布的内容:
①在无人回复的情况下,可以通过自助删帖功能随时删除(自助删帖功能关闭期间,可以联系管理员微信:8542508 处理。)
②在有人回复和讨论的情况下,主题帖和回复内容已构成一个不可分割的整体,您将不能直接删除该帖。
2、禁止发布任何涉政、涉黄赌毒及其他违反国家相关法律、法规、及本站版规的内容,详情请参阅《蒲公英论坛总版规》。
3、您在本站发表、转载的任何作品仅代表您个人观点,不代表本站观点。不要盗用有版权要求的作品,转贴请注明来源,否则文责自负。
4、请认真阅读上述条款,您发帖即代表接受上述条款。

QQ|手机版|蒲公英|ouryao|蒲公英 ( (京)-非经营性-2014-0058 京ICP证150354号 京ICP备14042168号-1 )

GMT+8, 2024-3-29 23:10

Powered by Discuz! X3.4运维单位:苏州豚鼠科技有限公司

Copyright © 2001-2020, Tencent Cloud.

声明:蒲公英网站所涉及的原创文章、文字内容、视频图片及首发资料,版权归作者及蒲公英网站所有,转载要在显著位置标明来源“蒲公英”;禁止任何形式的商业用途。违反上述声明的,本站及作者将追究法律责任。
快速回复 返回顶部 返回列表