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测量梯度方法的驻留体积驻留体积是梯度形成点和色谱柱入口之间系统的总体积。请在“方法转换计算器”中为以下系统指定驻留值: 请通过以下步骤测量驻留体积,如果要采用其它方案,则必须使用该方案测定原始和目标系统的驻留体积。 要求:必须使用相同的测量技术来获取原始和目标驻留体积。 必备材料 - LC/MS 级水
- 手套:干净、没有粉尘、耐化学物质
- 紫外检测器,例如 TUV 或 UV-Vis 2489
- 毛细管限流器
- 咖啡因
要计算驻留体积: - 如有必要,请在系统中添加紫外检测器。
- 使用毛细管限流器替换色谱柱。
重要说明:选择的限流措施需将最小反压保持在 13,790 kPa(137,895 mbar,2000 psi)。 - 准备 100% 的 LC/MS 级水作为“溶剂 A”,含 10 mg/L 咖啡因的 100% LC/MS 级水作为“溶剂 B”。
- 按照如下所示指定溶剂管理器梯度:
时间 (min)
流速 (mL/min)
%A
%B
初始
1.00
100
0
5
1.00
100
0
25
1.00
0
100
30
1.00
0
100
- 指定采集吸光度数据的通道,包括溶剂组分 %B 的曲线。
- 将紫外检测器波长设置为 273 nm。
- 运行方法。
- 在色谱中,请执行以下操作:
- 确定实验 t1/2 — 吸光度曲线达到 100% B 对应吸光度值 50% 时的绝对时间。
- 确定设定的 t1/2 — 设定的梯度达到 50% 时的绝对时间。对于指定的梯度,该时间为 15 min。
在下方的示例色谱中,溶剂组分 %B 的设定梯度为黑色曲线,实验曲线为红色。 显示驻留时间的示例色谱 [img][/img] tD = t½ 实验 - t½ 设定 VD = tD × F,其中: F = 流速 (mL/min)
以上摘取自waters色谱柱计算器帮助文件
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