吸入制剂微细粒子剂量方法开发及验证

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吸入制剂系指原料药物溶解或分散于适宜介质中，以气溶胶或蒸气形式递送至肺部发挥局部或全身作用的液体或固体制剂。其包括吸入气雾剂、吸入粉雾剂、吸入喷雾剂、吸入液体制剂和可转变成蒸气的制剂。
《中国药典》2020版四部通则0111“吸入制剂”中项下对“微细粒子剂量”做出了明确规定：除另有规定外，照吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法（通则0951）检查，照各品种项下规定的装置与方法，依法测定，计算微细粒子剂量，应符合规定。可见微细粒子剂量是吸入制剂质量标准中必须有的内容。在这样的情况下，微细粒子剂量方法开发及验证应该怎么做？这是一个值得探讨的问题。本人根据自己的工作经历，以吸入液体制剂为例，阐述对于该问题的理解，个人浅见，作抛砖引玉之用。

一、方法开发

1、装置的选择

《中国药典》2020版四部通则0951吸入制剂微细粒子空气动力学特性测定法检查中，一共有3种装置：装置1（双级撞击器）、装置2（andersen  cascade  impactor，ACI）、装置3（next  generation  impactor，NGI），其中装置1（双级撞击器）和装置3（next  generation  impactor，NGI）可以用于吸入液体制剂，其中装置1（双级撞击器）为玻璃材质，操作繁琐，装置3（NGI）操作简单，并根据不同的粒径分为了7级，故微细粒子剂量检测常采用该装置。

2、测试方法的选择

因微细粒子剂量测定的也是主成分，故可以选择该品种质量标准项下含量测定方法（HPLC法），作为其微细粒子剂量的检测方法。

3、提取溶剂、提取溶剂体积及提取方法选择

①提取溶剂：一般选择流动相。

②提取体积：雾化杯体积较大，样品残留较多，提取体积用量较大，范围为100mL-250mL；人工喉、1至7级样品盘及MOC滤纸提取体积为10-25mL之间。

4、涂层的考察

为确保能够有效地收集颗粒，可将甘油、硅油或其他合适液体溶于挥发性溶剂中，在每级收集杯表面进行涂层，涂层一般为甘油、硅油，也可以不加涂层，需通过试验对比进行不同涂层或不进行涂层的结果差异。

5、雾化体积

按照药品说明书，将一定体积的药品放入雾化装置中，一般为取1支。

6、雾化时间

通过前期做实验试雾化情况制订，雾化几分钟能雾化完全，根据检测结果制订。有些药品说明书会说明雾化几分钟，可在此基础上进行适当筛选。

二、方法验证

以XXX吸入溶液（规格2mL：25mg）含量测定为例：

对照品溶液取XXX对照品约25mg，精密称定，置100mL量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，精密量取该溶液10mL，置100mL量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。

色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（76∶24）为流动相；检测波长为240nm；进样体积20μL。

系统适用性要求理论板数按XXX峰计算不低于3500。

微细粒子剂量操作：

取本品1支，置雾化器中，调节真空泵使空气流速为15 L/min（±5%），连接雾化器及撞击器，开启雾化器及真空泵，测定时间为2 min。关闭雾化器及真空泵，拆除撞击器。

样品配制：

溶剂：含量测定项下流动相。

雾化杯：用流动相冲洗定容至100mL；

人工喉：用流动相冲洗定容至20mL；

MOC滤纸：取MOC滤纸至烧杯中，加入20mL流动相，超声15min。

1到7及样品盘：10mL、10mL、10mL、20mL、20mL、10mL、10mL。

配制完成，按照拟定含量色谱条件进行检测。

1、专属性

空白辅料溶液：按拟定处方，不加主药，配制成空白辅料溶液。

雾化杯收集液：用流动相多次冲洗雾化杯，将冲洗液收集置20mL量瓶中，并用流动相稀释定容，摇匀，即得。

收集杯提取液：取收集杯，精密加入流动相20mL，摇匀，即得。

MOC滤纸提取液：取滤纸置烧杯中，精密加入流动相20mL，超声15min，滤过，取续滤液，即得。

2、涂层的选择

方法：使用甘油、硅油对1-7级样品盘进行涂层，将样品盘置于撞击器中。按照拟定的提取溶剂、提取方式、提取体积配制样品，并按照含量色谱条件进行检测，并与不加涂层的测定结果相比，确定是否需要涂层。

▲甘油涂层回收率结果

部位	雾化杯	人工喉	1 级	2 级	3 级	4 级	5 级	6级	7级	MOC
测得量（mg）
测得总量（mg）
加入量（mg）
回收率

▲硅油涂层回收率结果

部位	雾化杯	人工喉	1 级	2 级	3 级	4 级	5 级	6级	7级	MOC
测得量（mg）
测得总量（mg）
加入量（mg）
回收率

▲不涂层回收率结果

部位	雾化杯	人工喉	1 级	2 级	3 级	4 级	5 级	6级	7级	MOC
测得量（mg）
测得总量（mg）
加入量（mg）
回收率

3、线性

因微细粒子剂量检测方法采用的是含量测定的方法，为了节省研发时间，在含量测定方法验证线性试验中，线性浓度范围最好包括微细粒子剂量所用的样品浓度，而这些在开发实验中就可以得知各样品浓度，故此处不需要单独验证，可与含量测定线性结果共用。

4、准确度

取本品2mL，在NGI上进行试验，按确定的微细粒子剂量测算方法配制样品，进行检测，计算各级样品主药质量之和，并与加入雾化器的药量相除，得到回收率。平行进行3次试验。

▲回收率测定结果

部位	第一次	第二次	第三次
总检出量（mg）
加入雾化器的标示量（mg）
回收率（%）

5、精密度

5.1重复性

取本品，由一名检验员在同一日期，同一仪器上进行检测，按微细粒子剂量测试方法平行测试3次，对结果进行分析，计算微细粒子剂量（FPD）、微细粒子分数（FPF）、质量中值粒径（MMAD）和几何标准偏差（GSD），并计算它们RSD值。

▲重复性试验测定结果

测试次数	FPD	FPF	MMAD	GSD
1
2
3
RSD（%）

5.2中间精密度

在同一实验室，不同检验员、不同检测时间，按微细粒子剂量测试方法平行测试3次，对结果进行分析，计算微细粒子剂量（FPD）、微细粒子分数（FPF）、质量中值粒径（MMAD）和几何标准偏差（GSD），并计算它们RSD值及重复性和中间精密度的累积RSD值。

▲中间精密度试验测定结果

测试次数	FPD	FPF	MMAD	GSD
1
2
3
RSD（%）

▲重复性和中间精密度测试数据统计

试验人员	测试次数	FPD）	FPF	MMAD	GSD
人员A	1
	2
	3
人员B	1
	2
	3
RSD（%）

6、溶液稳定性

①样品溶液稳定性

样品溶液取各级样品盘中最低浓度和最高浓度进行考察，分别于0h、4h、8h、12h、24h进样，通过测得的含量考察样品溶液稳定性。

▲样品溶液稳定性测试结果

时间点	0h	4h	8h	12h	24h	RSD%
最低浓度
最高浓度

②对照品溶液稳定性

取对照品溶液，分别于0h、4h、8h、12h、24h进样，连续进样5针，作为0h数据，之后每隔约4h进样一次，并于序列最后进样1针，通过计算回收率来考察稳定性。

▲对照品溶液稳定性结果

时间点	4h	8h	12h	24h
回收率

7、雾化时间考察

通过雾化时间的改变，以FPD、FPF、MMAD和GSD为指标进行评价，来考查测试方法的耐用性。

▲雾化时间测试结果

雾化时间	微细粒子空气动力学特性
	FPD	FPF	MMAD	GSD
正常条件
雾化时间***S
雾化时间***S
RSD（%）

8、均一性试验

一般取中试样品，考察不同批次之间（取3批）、同一批次多次检测（3次测定结果）之间的差异。

▲不同批次之间测定结果

批次	微细粒子空气动力学特性
	FPD	FPF	MMAD	GSD
01批
02批
03批
RSD（%）

▲同一批次多次检测

次数	微细粒子空气动力学特性
	FPD	FPF	MMAD	GSD
1
2
3
RSD（%）

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猫咪特工

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dengjianyyy

涂层选择实验，如何在各级样品盘中加入定量样品？喷？涂？撒粉末？还是倒溶液？
准确度验证实验设计是错误的。