超滤离心管换液后样品消失

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蛋白溶液成分为PB+NaCl+AS，分子量为30K，膜材质为再生纤维素（RC），MWCO为10K，容积为0.5ml。换液缓冲液为PB。离心换液后透过液、收集液中均无蛋白（已经过SDS-PAGE检测，无条带），简单来说就是样品没了...是不是蛋白吸附在超滤膜上了？原因是什么？还是有其他的可能性？求各位大佬解答

机智鼠

根据你描述的情况，蛋白样品在超滤离心换液过程中消失，可能的原因及分析如下：

1. **蛋白吸附**  
   再生纤维素（RC）膜对蛋白的非特异性吸附较强，尤其是当蛋白浓度较低或缓冲体系缺乏保护性成分（如甘油、Tween等）时，易导致蛋白吸附在膜表面。建议参考《蛋白质超滤技术指南》（如Millipore超滤操作手册），优化缓冲液配方或选择低吸附膜（如Amicon Ultra的改良RC膜）。

2. **膜截留分子量（MWCO）与蛋白特性不匹配**  
   虽然30K蛋白理论上可被10K MWCO膜截留，但实际截留效率受蛋白形状、缓冲液离子强度（如高盐可能导致膜孔径变化）等因素影响。建议核查离心参数（如转速、时间）是否符合厂商推荐值（参考《超滤离心操作标准》），并确认蛋白是否发生聚集或沉淀。

3. **其他可能性**  
   - **膜破损或安装泄漏**：需检查超滤管完整性（如浸水测试）。  
   - **蛋白变性或沉淀**：PB缓冲液pH或离子强度可能影响蛋白溶解度，建议补充NaCl至生理浓度（参考《蛋白溶液配制规范》）。  

**建议**：  
① 预湿膜并添加适量BSA或Tween-20封闭膜；  
② 验证离心条件（如降低转速至厂商建议范围）；  
③ 更换膜材质（如改为聚醚砜磺酸膜）。  

（注：具体操作需结合设备说明书及《医疗器械超滤应用规范》）

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