菌种的纯度和特性确认

HeYixiao

大家买回来的冻干粉有做纯度和特性确认吗？怎么操作的？有没有相关的文件？对于镜检染色，是每个菌种都适用吗？还是适用于革兰氏菌？

世间始终你好

你提到的是冻干粉的质量确认、镜检染色适用性的问题，下面我逐一回答：

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一、买回来的冻干粉是否要做纯度和特性确认？ 是的，建议做纯度和特性确认，尤其用于药品、医疗器械、生物制品、食品检测等受控应用场景。

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【1】纯度确认内容

• 菌落形态观察（在适宜培养基上接种，培养后观察）
  
• 镜检染色（常用革兰氏染色、抗酸染色等）
  
• 杂菌检测（是否有杂菌或污染存在）
  
• 生长特性对比（在特定培养条件下观察）
  
• 必要时：基因测序/生化反应对比（用于关键性鉴定）
  
  

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【2】纯度确认操作流程举例：

• 取冻干粉适量复溶
  
• 接种适宜培养基平皿（如 TSA、Nutrient agar）
  
• 培养至指定时间（通常24~48h，需根据菌种）
  
• 观察菌落形态（是否均一）
  
• 做革兰染色/镜检（看形态是否一致）
  
• 杂菌检测（如采用选择性培养基看有无非目标菌）
  
  

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【3】特性确认（选做，特别用于挑战试验、工艺验证等场合）

• 耐热性、pH适应性等
  
• D值、Z值验证（生物指示剂相关）
  
• 生长速率、最适温度
  
  

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二、镜检染色是否适用于所有菌种？ 不完全适用。通常情况下：

• 革兰氏染色：适用于绝大多数细菌（分革兰氏阳性/阴性）
  
• 抗酸染色：用于分枝杆菌类
  
• 芽孢染色：适用于枯草芽孢杆菌等芽孢类菌
  
• 墨汁染色：用于观察荚膜
  
• 苏丹染色：观察脂质颗粒
  
  

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所以：

镜检染色并非“所有菌种”都适用，但革兰氏染色是最常用的通用染色法之一，适合大多数常见细菌的初筛与纯度判断。

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三、是否有标准文件或指导原则？有！可参考以下规范：文件内容
《中国药典》通则《微生物鉴定法》规定菌种纯度确认、镜检等操作
《药品GMP》《医疗器械GMP》对培养物纯度、污染控制等有要求
《ISO 11138》《USP <55>》对生物指示剂中的微生物要求纯度和特性确认
《ISO 11133》《GB 4789》等对食品/微生物培养基使用的标准，提及镜检方法
各菌种供应商COA/IFU说明书通常会提供复苏、染色、纯度确认等建议方法

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总结：

• 冻干粉微生物建议在初次使用时做纯度和特性确认，确保安全可靠；
  
• 镜检染色常用革兰氏染色，但也要根据菌种选择合适的染色方法；
  
• 建议保留操作记录，并与菌种供应商的COA说明书对照执行，有需要时可编写**《菌种确认操作SOP》或《微生物纯度确认记录表》**等。
  
  

逸清草堂

冻干粉不做

凯rq8rec5y

平板划线+镜检

HeYixiao

逸清草堂 发表于 2025-7-21 10:16
冻干粉不做

飞检老师说我们不做

18913555243

完整的话，就是平板划线、革兰氏染色、用选择性培养基看特性，在药典里有具体操作的。

逸清草堂

HeYixiao 发表于 2025-7-21 13:50
飞检老师说我们不做

冻干粉属于标准菌株，不是标准储备菌株
详细的你可以参考9203菌种那一节

咒逐

逸清草堂 发表于 2025-7-21 14:03
冻干粉属于标准菌株，不是标准储备菌株
详细的你可以参考9203菌种那一节

额，你意思是验收不做嘛，验收确实不做，只要验收密封完整即可...

但是你话可不能这么说，相当于是买回来时候不用做，但是用的时候就得做，

咒逐

Q1，按照楼里我答复，严谨说验收时候不做，检查密封即可，启封使用时候得做，“从国内或国外菌种保藏机构获得的标准菌株经过复活并在适宜的培养基中生长后，即为标准储备菌株。标准储备菌株应进行纯度和特性确认。”

Q2，纯度好说，复壮培养后涂布平板检查杂菌即可。特性确认比较麻烦，通常可以用专业试剂盒做，试剂盒内容不得少于1106中规定的分离方法以及特定鉴定培养，如白色念珠菌必须要做念珠菌显色培养基鉴定。

Q3，镜检是每个都适用，染色不是，黑曲霉不用染色。黑曲霉需要观察菌丝和孢子囊等具体形态。

Q4，最后一个不算回答，只是纠正说法，没“革兰氏菌”这个说法，只有“革兰氏阳性/阴性菌”。革兰氏染色是一种技术，能运用在大部分生物样本，包括简单结构的精细胞或者不是细菌真菌的原虫类。革兰氏染色法除了鉴别革兰氏阴阳外，最核心的作用是染色供观察，X2000以后，全都是小透明，没这个看不了。