【撒金币啦】环氧乙烷残留检测异常排查

巴巴

有没有做气相测环氧乙烷残留的大神，请教问题。
我们做标曲，1 2 5 10 15 20 微克/ml ，现在1和2的基线漂移厉害，峰响应值偏低。曲线不好没法进样。想知道怎么排查。

前情：我们首次验证测残留是4微克/g, 这一次做了两批产品，第一批测试残留0.25微克/g（图1和图2），下降数量级太厉害了，即使解析时间14天也不能这么低。
灭菌工艺如下图3。柜子20立方米，产品材质是3mm厚度,6mm孔径密度的海绵。问了AI0.25微克残留是不可能的。
然后第二批测了7纳克/g残留（图4），更离谱，基线漂移很大，怀疑是标曲不适配，因为隔了没一个月做的没有重新定标。
后面重新买标准品再定标就出现低浓度基线不好的问题。我想知道这整个测试是不是都有问题，是不是一开始都存在问题没有意识到，因为我没做过检验，检验员也是执行人，公司没有很专业的所以问问大佬们。有点着急。谢谢。
图1：

巴巴

图2：
图3：



图4：
图5：

巴巴

发不了图片啊咋回事

巴巴

正文传不了图片，我放在这附件里了，希望有技术人员帮忙解答，非常感谢

13712754309

币来

Neuro_psycho

帮顶，赚金币

世间始终你好

怎么回个复还要审核

世间始终你好

先别烦心结论，按“标曲—系统—样品”三段法把问题掰开排。你现在的症状是：低标（1、2 μg/mL）基线漂、峰响应偏低 → 标曲不稳 → 得到离谱的样品结果（0.25 μg/g、7 ng/g）。这通常不是“样品真的很低”，而是低浓度阶段的系统噪声/吸附/配液或定量链条出错在作怪。

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1) 先做 30 分钟快速自检（不动样品）目标：把“系统噪声”和“人为配液/操作”两类因素先排一半。

• 空白 & 稀释剂空针序列
  
  
  • 连续进 3 次稀释剂（blank）→ 观察基线噪声（N）和漂移（D），有没有幽灵峰/拖尾影子。
    
  • 若噪声>低标峰高的 1/10 或漂移>5 mAU/h（UV场景）或>设定阈值（FID/其他），先别做标曲，转去做系统原因排查（第 3 节）。
    
    
• “同一低标重复进样 6 次”
  
  
  • 仅用 2 μg/mL 标液，进样 6 次 → %RSD（峰面积）≤5%为佳（≤10%也可接受，取决方法）。超标＝注样或基线不稳。
    
    
• 注样/进样核对
  
  
  • 换一支新微量进样针/针芯，检查样品针座密封圈，做漏液/气泡检查。
    
  • 改用外标→加内标（IS）试一遍（选化学性质接近、不与待测互相干扰的化合物）。如果加 IS 后低标回归稳定很多，八成是进样体积重复性或基线噪声问题。
    
    

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2) 重建标曲的“黄金流程”（把低浓度做“能看见、能算准”）

标准建议：每次开机/换流动相/换柱/隔夜后，重标。低浓度段要用加权回归。

• 标准物核对
  
  
  • 新/旧批号、纯度、储存条件（避光、低温、干燥），开瓶/配置台账要有。
    
  • 母液建议用质量法（称重）配置，避免移液误差；逐级 5–10 倍等比稀释。
    
  • 稀释剂=与流动相等强度/等组成（至少 A 相比例一致），必要时加 0.05–0.1%酸/胺盐缓冲，减少吸附。
    
    
• 容器/吸附
  
  
  • 低浓度易吸附在玻璃壁/硅胶垫/普通玻璃瓶上。改用：
    
    
    • 低吸附玻璃/PP 料小瓶；
      
    • 新瓶新隔垫；避免多次冻融与长期放置。
      
      
  • 低标重进 3 次，若逐次峰面积递增＝前一次吸附、后一次洗脱（典型吸附信号）→ 更换容器/加微量有机/离子对或改 pH。
    
    
• 基线与 LLOQ 的硬性门槛
  
  
  • 先做噪声测定（空白 1–2 min 的峰-峰噪声）。
    
  • 设定：LOQ 的 S/N ≥ 10（LOD ≥ 3），回算浓度偏差：LLOQ 允许 ±20%，其余点 ±15%。
    
  • 低标若达不到 S/N≥10，就提升低标浓度或优化条件（见第 3 节），不要勉强纳入回归。
    
    
• 回归与权重
  
  
  • 全程至少 6 点：1、2、5、10、15、20 μg/mL。
    
  • 用1/x 或 1/x² 加权线性回归；检查残差图是否随机分布。
    
  • 接受标准：r ≥ 0.999（或残差% ≤规定）、各点回算合格；否则重配/重建。
    
    
• 系统适用性（每次标曲前）
  
  
  • 目标化合物保留时间 RSD ≤1%；理论塔板、对称因子在历史窗内；
    
  • 低标S/N ≥10、6 次重复 RSD ≤10%。
    
    

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3) 低标“基线漂+响应低”的常见根因与对策（按命中率从高到低）

• 流动相气泡/溶氧、脱气不彻底
  → 在线脱气开满，流动相超声/氦吹；检查混合比例/梯度阀；恒温箱稳定后再进样。
  
• 柱子/系统污染或活性位点未钝化（低浓度被吸附）
  → 先强力洗脱程序清洗（有机→水→有机，外加适度酸/碱冲洗，按柱说明）；
  → 装保护柱/预柱；对强极性或碱性化合物，考虑离子对/缓冲盐或改 pH；
  → 必要时上新柱比对。
  
• 进样溶剂“过强”或“过弱”
  → 低标用与流动相等强度溶剂，避免溶剂强度差导致前沿/塌峰→峰高偏低。
  
• 自动进样器问题（进样体积不准/残留/交叉污染）
  → 增强针洗（强溶剂/等强度两步洗）、调大抽样与装样速度、更换针座密封；
  → 做carryover 测试：高标后跟空白，空白峰面积应≤高标的 0.1–0.2%。
  
• 检测器/光源/波长设置不当
  → UV：核对λmax、带宽；灯龄/能量；必要时流通池清洗。
  → FID/其他：温控、气路流量与纯度、基线漂移监控。
  
• 配液与单位链条错误
  → 逐级稀释表（谁、何时、体积、目标浓度、计算公式），复算一遍；
  → 坚持质量法配母液，体积法做工作液；每步留一支“留样标液”。
  
• 容器/隔垫析出造成基线污染
  → 改用PTFE/无析出隔垫；不同批次小瓶做空白对照。
  
  

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4) 为何你会得到 0.25 μg/g 甚至 7 ng/g？

这两个值相对你历史验证的 4 μg/g 确实异常偏低。最常见的“假低”来源：

• 大稀释倍数，任一环节少吸/少加（比如 1→100→1000 的连环稀释，任何一步偏差都会把结果拉低数量级）。
  
• 提取回收率下降/吸附（海绵类基质特别容易“吃”分析物）：
  
  
  • 做回收率/加标回收（前加/后加），回收率不稳＝样品制备环节丢失。
    
  • 在提取液中加入少量有机/盐/表活抑制吸附（以方法学验证为准）。
    
    
• 标曲下端不可靠（S/N<10、回算超差），低端点把回归线“拽歪”，样品回算被压低。
  
• 单位/密度换算差错（μg/g &#8596; μg/mL &#8596; ng/g；样品称量与总体积折算；含水率未校正）。
  
• 内标缺失导致进样体积/基线漂移直接映射到结果。
  
  

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5) 立刻可执行的“复位方案”（当天就能做）

• 只用 3 个点先“拉直曲线”：2、10、20 μg/mL，加内标，加权 1/x 做线性，看回算与残差。
  
• 把 1 μg/mL 暂时剔除，直到你把低标 S/N≥10 做到位（通过降噪/防吸附/优化注样）。
  
• 做一次标准加入（matrix-matched）：取一份海绵样品提取液，分别加 2、10 μg/mL 的已知量，按斜率法回推回收。
  
• 复测一批历史“已知水平”的样品留样（当作外部质控），确认本次系统不会给出系统性偏低结果。
  
• 重做完整标曲（≥6 点）并保存：空白→低标→高标→空白（看 carryover），所有点回算合格才上样。
  
• 样品稀释倍数尽量小（在不超标的前提下），必要时浓缩到标曲中部范围。
  
  

---

6) 报告与放行的“底线标准”（建议写入SOP）

• 每次分析必须有：空白、系统适用性、加权线性回归、各点回算表、LLOQ S/N 证明、低标 6 次重复 RSD。
  
• 样品每批至少做平行 2 份，相对偏差≤15%（低于 10×LLOQ 时可放宽至 20%）。
  
• 每月至少一次外部质控样或留样复测，画趋势图（均值±3SD）盯“假低/假高”。
  
  

---

7) 小公式与换算（防止“被稀释”）

• 若取样 mm g、提取定容至 VV mL，进样前再稀释 DFDF 倍，回归得到样品溶液浓度 CC（μg/mL），
  则样品含量（μg/g）：
  结果=C×V×DFm\text{结果} = \frac{C \times V \times DF}{m}每一步都写进台账；任何一个环节的 10% 误差都会在结果上成比例反映。
  
  

---

结论
你看到的“1、2 μg/mL 低标基线差+响应低→样品超低”是典型的低端定量不可靠问题。按上面的快检→重建标曲→低端优化三步做，一般当天就能定位：要么是系统噪声/吸附，要么是配液/稀释链条。先把 LLOQ 做“真可用”（S/N≥10、加权回归、回算合格），再谈样品的真高低。需要的话，我可以把你的现有稀释步骤和计算帮你逐行核对一遍，顺便给你做一个“标曲回算模板”。

你我生而平凡

也有可能是设备问题，换酒精试试。看看出峰，多排查一下原因。

胜利者

排队

whl199

这概率，看个热闹好了。

龙鸟犀水派

加湿是不是海绵吸水后又吸收环氧乙烷了，多测几次平行样看看

抱琴揽风

环残的标准曲线本身就不太好做，之前做过标准曲线，相关系数勉强达到三个9。通过你的描述感觉是气相色谱仪的仪器平衡时间不够，响应值不好。你们可以把顶空进样器的平衡时间给调整一下，给仪器留出平衡的时间来。残留0.25微克/g和7纳克/g残留都不像是正常的环残测定结果，你们新配一下对照溶液重新进样试试，标样放时间长了也会挥发。

18943082964

世间始终你好 发表于 2025-8-15 17:55
怎么回个复还要审核

因为你没到正教授        

yhgz

路过学习！

安安份份的小尘1

针对您描述的残留检测异常（结果异常偏低、基线漂移、标曲失效等问题），需系统性排查检测全流程。结合HPLC操作要点和您提供的信息，建议按以下优先级逐步排查：

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一、核心问题诊断

【表格】
异常现象        可能原因        优先级       
1和2μg/ml基线漂移+峰响应低        流动相污染/析晶、色谱柱失效、检测器异常、标准品降解        紧急       
残留结果骤降（4→0.25μg/g）        前处理损失、样品基质干扰、灭菌后解析不足、检测系统偏差        高       
第二批结果更低（7ng/g）        标曲失效放大误差、仪器灵敏度下降、灭菌工艺波动        高

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二、关键排查步骤与解决方案

1. 紧急解决标曲基线问题（确保检测能力）

   流动相优化

       按要求重配流动相：水相溶质（如缓冲盐）必须加热溶解后与有机相混合、抽滤，禁止分路泵入

       更换新过滤膜（0.45μm尼龙膜），检查滤液有无结晶

   色谱柱维护

       反向冲洗色谱柱排除筛板堵塞（参考）

       测试柱效：注入萘/咖啡因标准品，塔板数下降＞20%需更换新柱

   检测器与光源

       检查氘灯能量：能量值＜50%需更换（响应低的核心原因，参考）

       清洗流通池：注射器抽吸10%异丙醇冲洗

2. 复核前批检测结果可靠性

   复测首批样品

       用新活化色谱柱+新配标曲重复检测首批样品（需剩余样品）

       添加阳性对照：在样品中加标1μg/g标准品，回收率应在80-115%

   验证灭菌解析效果

       对同批未灭菌海绵检测初始残留量（确认是否原工艺已失效）

       模拟灭菌：取新海绵浸渍原药液，灭菌后检测残留是否仍异常低

3. 排查灭菌工艺与解析合理性

   灭菌柜验证缺陷（图3信息不足，重点核查）：

       温度分布：20m柜内是否达到121℃、F0≥15（海绵可能阻碍蒸汽穿透）

       装载方式：6mm孔径海绵若紧密堆叠，会导致冷点（需增加温度探头测试）

   解析时间不足：

       14天解析对3mm厚海绵可能不足（尤其通风不良时），需实测柜内残留溶剂浓度

4. 标准品与标曲管理修正

   标准品处理

       新购标准品需核验证书纯度（≥98%）及储存条件（避光、-20℃）

       配制时用挥发性溶剂（如甲醇）快速溶解，避免吸湿降解

   标曲优化

       浓度点改为：0.5, 1, 2, 5, 10, 15μg/ml（避免低端不线性）

       按要求：每个浓度重复3针，R＞0.999且截距检验合格

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三、整体流程纠错清单

【表格】
步骤        纠错项        依据       
样品前处理        加入保护剂（如1%抗坏血酸防氧化）        2       
色谱条件        梯度洗脱改为A相：水相-有机相混合液（如95:5）        3       
系统适用性        每批次进样前测5针空白，RSD≤5%才继续        13       
数据审核        强制要求：标曲R≥0.998 + 加标回收率达标        4

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四、后续验证建议

  1. 紧急措施：

       暂停产品放行，外包至第三方实验室复测（提供原始样品）

  2. 工艺复核：

       对灭菌柜进行空载/满载热分布测试（特别是海绵中心点）

  3. 人员培训：

       检验员需掌握：柱效测试、灯能量检查、流动相配制规范（参考）



注：若按此流程仍无法解决，需怀疑检测方法本身缺陷（如衍生化不完全），建议开发HPLC-MS/MS方法确认。

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根因推测及解决路径

graph LR
    A[结果异常低] --> B{检测系统问题？}
    B -->|是| C[氘灯能量不足/柱效下降] --> D[更换硬件+重测]
    B -->|否| E{样品问题？}
    E -->|是| F[灭菌穿透不足/解析不够] --> G[优化装载+延长解析]
    E -->|否| H{前处理损失？}
    H -->|是| I[添加保护剂+控制萃取pH]
    H -->|否| J[标准品降解/标曲失效] --> K[更换标准品+重做标曲]

执行优先级：先解决标曲失效（1-2天可完成），再复测首批样品（3天），同步启动灭菌验证（1周）。数据可靠性存疑时，务必外包复测止损。

helen2021

世间始终你好 发表于 2025-8-15 17:55
先别烦心结论，按“标曲—系统—样品”三段法把问题掰开排。你现在的症状是：低标（1、2 μg/mL）基线漂、 ...

膜拜大佬！！！！