EOPC怎么建立？

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如果收获时细胞活率低，正常都是传几代至活率回复到90%以上再建库。如果收获时活率本来就很高，比如95%以上，可以直接基因用冻存培养基建库吗？

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世间始终你好

先把概念掰清楚：
EOPC（End-of-Production Cells，生产末期细胞）的用途，是代表“该工艺在允许的最大细胞年龄/生产周期结束时”的细胞状态，用于遗传稳定性与安全性（如支原体/外源因子）等确认。它应该直接来源于一次真实的生产/模拟生产批末期的细胞，而不是再传代“养好”之后的细胞。否则就不再是“生产末期”的代表性样本了。
一、EOPC的建立要点（适用于CHO等哺乳动物细胞）

• 取材时点
  
  
  • 在放料/终止培养前或同时，从生产生物反应器（或等同规模的模拟批）直接采集细胞。
    
  • 采样时记录：批号、接种来源（哪支WCB）、累计传代/倍增数、培养天数、关键工艺参数（温度、pH、溶氧、补料策略等）、取样时活率与密度。
    
    
• 只允许“采集→冻存”，不再传代
  
  
  • 不进行任何“恢复性传代”或“再培养”。
    
  • 目的是保持与生产末期完全一致的遗传与生理状态。
    
    
• 制备量与装量
  
  
  • 建议制备20–50支（视企业计划做的项目与保存年限而定）。
    
  • 推荐装量：1–5×10^6 个活细胞/支，1 mL/支（或按你们公司常规冻存装量）。
    
  • 如末期细胞密度较低，可集中离心后重悬，但仍不得再培养。
    
    
• 冻存基质与程序降温
  
  
  • 冻存液可用常规配方：7–10% DMSO + 含蛋白/白蛋白或化学限定保护剂的基础培养基（血清或无血清均可，和MCB/WCB一致或公司认可的等效方案）。
    
  • 程序降温：约 −1 °C/min 至 −40 °C，再降至 −80 °C 后尽快转入液氮汽相长期保存。
    
  • 冻存前可温和洗涤1次（去残余产物/代谢物、过量补料成分），有助于提升复苏后活率，但不可造成选择压力（比如长期贴壁消化等）。
    
    
• 质量记录与放行
  
  
  • 每支冻存管建立完整标签与台账（批号/支号/装量/日期/操作者/冻存程序号）。
    
  • 做快速可得的放行项目：外观、装量、冻后活率（预试融1–2支）；正式检测见下。
    
    

二、EOPC应开展的检测（公司常用、监管常见期望）

• 身份/来源一致性：例如 STR（人源）、特异性PCR 等。
  
• 遗传稳定性：拷贝数（qPCR/ddPCR）、表达盒完整性（限制性图谱、PCR/测序）、已知热点位点检查、必要时核型。
  
• 支原体：通常建议做（即便MCB/WCB已做）。
  
• 外源因子筛查：按工艺与细胞系风险评估选择（如逆转录病毒样颗粒、体外/体内法或PCR法等）。
  
• 具体面板与频次按产品定位与区域法规、风险评估确定；但核心是证明生产末期仍与初始构建一致且无污染。
  
  

三、关于你提的两个实际问题1）“收获时活率低，先传几代到>90%再建库可不可以？”不可以。那样得到的是“传代恢复后的细胞”，不再代表生产末期。
正确做法：

• 直接用末期样本制备EOPC；
  
• 通过优化冻存步骤来提高冻后存活（如快速但温和的洗涤、合适的DMSO比例、严谨的程序降温、缩短室温暴露时间）；
  
• 若活率极低导致取材量不足，可在同一批次多点采样或与同一工艺阶段的并行罐合规合并（需事先在方案中定义且可追溯），但不要再培养。
  
• 这也是为什么平时会把“允许的细胞年龄上限/LIVCA”定义得更保守，既满足代表性又确保还能制得足量可测样品。
  
  

2）“若收获时活率很高（如95%+），能不能直接加冻存培养基建库？”可以，且这是最理想的。
注意点：

• 仍建议离心去上清、一次温和洗涤后按目标浓度重悬于冻存液，再程序降温入库；
  
• 全程低温操作（4 °C预冷耗材、DMSO现配现用、配好即分装降温），减少DMSO接触时间；
  
• 按上面的检测清单做EOPC的身份/稳定性/微生物确认。
  
  

四、常见易错点（避免后期被质疑）

• 把EOPC当成“可用于生产的银行（Bank）”。——EOPC只是留作检测与留样，不可用于生产。
  
• 采样晚于收获后、或复苏后再培养。——会失真。
  
• 未记录累计传代/倍增数（CPPD/PDL）与关键工艺参数，导致不能证明“确为末期”。
  
• 冻存不足量，后续补做又来自其他批或不同阶段，造成代表性不一致。
  
  

---

一句话原则：
EOPC的本质是“那一批、在生产末期的细胞长什么样”，所以在那一刻直接采、直接冻；活率高当然最好，活率低也不能再传代“养好”后再冻。只要把采样点、冻存流程、检测与追溯做扎实，监管与科学性都会站得住脚。

胜利者

学习

故障代号007

这题目和里面的内容杂乱七八糟的

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PGYPGYPGY2021

故障代号007 发表于 2025-08-21 14:00
这题目和里面的内容杂乱七八糟的

哦，我以为熟悉的人一下就能懂呢。。。

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PGYPGYPGY2021

世间始终你好 发表于 2025-08-21 06:19
先把概念掰清楚：
EOPC（End-of-Production Cells，生产末期细胞）的用途，是代表“该工艺在允许的最大细胞年龄/生产周期结束时”的细胞状态，用于遗传稳定性与安全性（如支原体/外源因子）等确认。它应该直接来源于一次真实的生产/模拟生产批末期的细胞，而不是再传代“养好”之后的细胞。否则就不再是“生产末期”的代表性样本了。
一、EOPC的建立要点（适用于CHO等哺乳动物细胞）取材时点

在放料/终止培养前或同时，从生产生物反应器（或等同规模的模拟批）直接采集细胞。
采样时记录：批号、接种来源（哪支WCB）、累计传代/倍增数、培养天数、关键工艺参数（温度、pH、溶氧、补料策略等）、取样时活率与密度。

只允许“采集→冻存”，不再传代

不进行任何“恢复性传代”或“再培养”。
目的是保持与生产末期完全一致的遗传与生理状态。

制备量与装量

建议制备20–50支（视企业计划做的项目与保存年限而定）。
推荐装量：1–5×10^6 个活细胞/支，1 mL/支（或按你们公司常规冻存装量）。
如末期细胞密度较低，可集中离心后重悬，但仍不得再培养。

冻存基质与程序降温

冻存液可用常规配方：7–10% DMSO + 含蛋白/白蛋白或化学限定保护剂的基础培养基（血清或无血清均可，和MCB/WCB一致或公司认可的等效方案）。
程序降温：约 −1 °C/min 至 −40 °C，再降至 −80 °C 后尽快转入液氮汽相长期保存。
冻存前可温和洗涤1次（去残余产物/代谢物、过量补料成分），有助于提升复苏后活率，但不可造成选择压力（比如长期贴壁消化等）。

质量记录与放行

每支冻存管建立完整标签与台账（批号/支号/装量/日期/操作者/冻存程序号）。
做快速可得的放行项目：外观、装量、冻后活率（预试融1–2支）；正式检测见下。

二、EOPC应开展的检测（公司常用、监管常见期望）身份/来源一致性：例如 STR（人源）、特异性PCR 等。
遗传稳定性：拷贝数（qPCR/ddPCR）、表达盒完整性（限制性图谱、PCR/测序）、已知热点位点检查、必要时核型。
支原体：通常建议做（即便MCB/WCB已做）。
外源因子筛查：按工艺与细胞系风险评估选择（如逆转录病毒样颗粒、体外/体内法或PCR法等）。
具体面板与频次按产品定位与区域法规、风险评估确定；但核心是证明生产末期仍与初始构建一致且无污染。

三、关于你提的两个实际问题1）“收获时活率低，先传几代到>90%再建库可不可以？”不可以。那样得到的是“传代恢复后的细胞”，不再代表生产末期。
正确做法：
直接用末期样本制备EOPC；
通过优化冻存步骤来提高冻后存活（如快速但温和的洗涤、合适的DMSO比例、严谨的程序降温、缩短室温暴露时间）；
若活率极低导致取材量不足，可在同一批次多点采样或与同一工艺阶段的并行罐合规合并（需事先在方案中定义且可追溯），但不要再培养。
这也是为什么平时会把“允许的细胞年龄上限/LIVCA”定义得更保守，既满足代表性又确保还能制得足量可测样品。

2）“若收获时活率很高（如95%+），能不能直接加冻存培养基建库？”可以，且这是最理想的。
注意点：
仍建议离心去上清、一次温和洗涤后按目标浓度重悬于冻存液，再程序降温入库；
全程低温操作（4 °C预冷耗材、DMSO现配现用、配好即分装降温），减少DMSO接触时间；
按上面的检测清单做EOPC的身份/稳定性/微生物确认。

四、常见易错点（避免后期被质疑）把EOPC当成“可用于生产的银行（Bank）”。——EOPC只是留作检测与留样，不可用于生产。
采样晚于收获后、或复苏后再培养。——会失真。
未记录累计传代/倍增数（CPPD/PDL）与关键工艺参数，导致不能证明“确为末期”。
冻存不足量，后续补做又来自其他批或不同阶段，造成代表性不一致。

一句话原则：
EOPC的本质是“那一批、在生产末期的细胞长什么样”，所以在那一刻直接采、直接冻；活率高当然最好，活率低也不能再传代“养好”后再冻。只要把采样点、冻存流程、检测与追溯做扎实，监管与科学性都会站得住脚。

学习了。谢谢！

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