抑菌效力测定

HSTg4x

请教各位老师，以下问题怎么解决：
1.培养基促生长试验每个配制批次必做促生长试验还是每个批号的培养基只需做一次？
2.接种菌数和药典要求差异大
供试品检查：求接种约1×108cfu/mL的试验菌至供试品。使用比浊法、血球计数法计出来的菌数，和要求偏差较大。用比浊法稀释的金黄色葡萄球菌，拿去平板计数，计出来有1×109。其他几个菌也都有5×108cfu/mL左右。
方法适用性：接种小于100cfu/mL的试验菌。根据比浊法稀释的新鲜培养物，接种后计出来大于100cfu。
3.供试品里面含有40%的乙醇，把试验菌接进去后，一个菌都不长。初始计数是0，这是可以接受的吗？

羽遥

1. 培养基促生长试验频率：按《中国药典》要求，每个配制批次均需做促生长试验。同一批号培养基若分多次配制，每次配制后都需检测，因配制过程（如灭菌参数、操作污染等）可能影响性能，不能仅以批号为单位做一次。

2. 菌数偏差问题：
   - 核心是校准计数方法：比浊法需用同菌株新鲜培养物制备标准比浊管（如麦氏比浊管），并与平板计数结果关联校准，建立“吸光度-实际菌数”对应关系；血球计数法需注意区分活菌与死菌，建议计数后结合平板倾注法验证。
   - 方法适用性中接种菌数超100cfu时，需重新优化稀释步骤，可通过“梯度稀释+多组平行试验”精准控制，确保接种量符合要求。

3. 含40%乙醇供试品的抑菌问题：若因乙醇强抑菌作用导致试验菌不生长，初始计数为0不可直接接受。需先进行方法适用性试验，证明该抑菌作用无法通过稀释、中和等方法消除，且供试品本身无菌风险可控（如工艺保证无菌），方可判定符合要求；否则需调整方法（如增加中和剂）重新验证。

不见猫骨头

楼上的说的已经比较全面了，我补充一下，第二问题，比浊法有问题，可能是仪器或者是对照管有问题你们再试试；第三个问题，初始计数为0什么意思，没明白；oh计数，是你模拟加菌过程，应该不加供试品吧，后面6h、24h什么的才是供试品加菌后计数

HSTg4x

羽遥 发表于 2025-9-9 11:11
1. 培养基促生长试验频率：按《中国药典》要求，每个配制批次均需做促生长试验。同一批号培养基若分多次配 ...

老师，关于第三个问题。方法适用性通过了，供试品检查出现初始菌数为0的情况，后面D7,D14,D28均为0。这可以判定符合要求了吧。

HSTg4x

羽遥 发表于 2025-9-9 11:11
1. 培养基促生长试验频率：按《中国药典》要求，每个配制批次均需做促生长试验。同一批号培养基若分多次配 ...

老师，初始菌数的计数是取（供试品加1*10^8cfu/ml菌液的混合物）来计数还是直接取（稀释好的1*10^8cfu/ml菌液）计数？

HSTg4x

羽遥 发表于 2025-9-9 11:11
1. 培养基促生长试验频率：按《中国药典》要求，每个配制批次均需做促生长试验。同一批号培养基若分多次配 ...

老师，我做了计数方法适用性，发现供试品稀释至10^-1有抑菌性，稀释至10^-2，10^-3无抑菌性。这样的话，做供试品检查是需要往稀释至10^-1的供试品里面加菌吗？另外，含35%乙醇的产品用什么样的抗凝剂会比较合适？我看中国药典上面写的是，稀释法。

羽遥

HSTg4x 发表于 2025-11-13 10:21
老师，我做了计数方法适用性，发现供试品稀释至10^-1有抑菌性，稀释至10^-2，10^-3无抑菌性。这样的话， ...

1、做供试品检查时不用往里面加菌，你只需要用那个无抑菌性的最低稀释级（对你来说就是10^-2）来做计数就行了。
2、含35%乙醇的产品通常不需要额外加抗凝剂，核心方法是“稀释法”，用药典规定的稀释液把它快速稀释到乙醇失去杀菌作用的浓度（比如1%以下）就行了