抑菌效力检查法USP51 凝胶产品 加菌液后如何混匀

HSTg4x

供试品是很黏的凝胶。

1.将试验菌接种至供试品中如何均匀分布？

2.如何保证D7,D14,D28取样时，取出来的样品是有代表性的？

世间始终你好

好问题！高黏度凝胶做 USP <51>（抑菌效力/防腐效力）时，核心是“先均匀、再可重复取样”。下面给你一套在审计中常用、可落地的做法。

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一、如何让接种菌在高黏度凝胶里“均匀分布”原则

• 接种体积≤1%（w/w 或 w/v），避免明显稀释或改变防腐体系。
  
• 全程无菌操作；每个挑战菌株独立一批样。
  
• 混合后尽快完成 T0 取样，避免菌数在混匀等待中变化。
  
  

推荐混匀路径（按优先级）

• 双注射器—三通混匀（最稳妥）
  
  

• 取等量凝胶到无菌大口注射器 A（或 2–3 倍于接种体积的量），将接种液加入注射器 A，装上大口径鲁尔锁三通与另一只空注射器 B 对接。
  
• 往返推送 20–50 次（必要时加一次性剪短/放大内径的无菌喇叭口接头），形成强剪切，实现微量接种液在高黏体系中快速分散。
  
• 再把混匀好的预混料“回填”至主批凝胶中，采用刮刀折叠+注射器往返补充混合 10–20 次。
  
  

优点：密闭、无气泡、均匀性高；基本不引入外源水分或表活。

• 顶置搅拌（桨式/螺带/锚式）+ 惰性玻璃珠
  
  

• 不建议磁力搅拌（高黏体系不起效）；选宽叶桨或锚式，低速起步再升速，边缘刮壁。
  
• 加入已灭菌玻璃珠（&#216;3–5 mm），边搅拌边滚动，可显著改善边界层混合。
  
• 全程容器加盖或用惰性隔膜，减少曝露与挥发。
  
  

• 行星式真空混合（如 Thinky）
  
  

• 小批量非常好用：先将接种液打入少量凝胶做“母混料”，再回拌主批。
  
• 设定低速脱泡程序，避免气泡夹带影响后续取样。
  
  

• 温和降黏法（条件允许时）
  
  

• 在不影响防腐体系的前提下，将凝胶和接种液在产品允许的最高温度下预温（如 30–40 °C），黏度下降后再混匀。
  
• 禁用任何会改变 pH/水活度/表活体系的稀释剂；除非你计划做方法学等效性论证。
  
  

混匀充分性的快速自检（建议做一次开发确认）

• 在 T0 同时从不同方位/深度各取 ≥3 份等量样，做菌落计数，计算最大与最小值的差 ≤0.3 log10或 RSD≤25%（团队可预设接受标准）。
  
• 也可用微量惰性染料做示踪（仅开发阶段），验证肉眼均匀性与流变剪切足够。
  
  

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二、如何保证 D7、D14、D28 取样“有代表性”首选设计：分装—一次性取样（最符合代表性与无扰动）

• 在完成最终均匀混合后，立即按每个时间点与每个菌株的需求量，等量分装到独立无菌容器（最佳：单次用量的小瓶/注射器/三明治袋）。
  
• 每个时间点只开对应容器，一次性取完需要量并立即中和/回收。
  
• 优点：无二次扰动、无再混匀、无层析与表面干燥风险；审计最友好。
  
  

若因样量/容器限制只能共用一桶（需更严谨的取样计划）

• 预先定义“多点合并取样”方案
  
  
  • 采用无菌宽口取样器：大口径正位移移液器/一次性无菌取样勺/无菌取芯器（cork borer）。
    
  • 固定取样位点：例如容器四象限+中心、上/中/下不同深度各取等量，合并为该时间点样品。
    
  • 每次取样前，若工艺文件允许，对容器做缓慢端翻（end-over-end）5–10 次帮助整体再均质；禁止剧烈搅拌以免改变体系或引入气泡/污染。
    
    
• 定量—定重
  
  
  • 高黏体系体积读数不准，按质量取样（天平校准，控温下称重）。
    
  • 使用正位移移液器/注射器取样，必要时切尖加大口径，减少抽吸误差。
    
    
• 防表面效应
  
  
  • 盖子内壁与表层容易水分挥发、保腐剂迁移不同步，避免只取表面；首刀弃去表层极薄一层后，再按位点取芯。
    
  • 取样后立即封口，减少挥发/氧化；若是共桶设计，每次开启时间尽量 <2 min。
    
    
• 样量与中和
  
  
  • 每个时间点、每个菌株准备足量样品，考虑到中和剂与洗脱体积（参考你们的中和/回收验证结果）。
    
  • 在正式试验前完成中和/回收有效性确认（不低于 70% 回收或证实中和充分），并在报告中交叉引用。
    
    

贮存与标识

• 每个时间点容器独立标识（菌株、批号、时间点、制备日期），密封、避光、规定温度下静置贮存。
  
• 同一时间点多平行（≥2）有助于异常值判断。
  
  

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小清单（可直接写进 SOP）

• 接种体积≤1%；每菌株独立混制。
  
• 选用双注射器三通法或顶置搅拌+玻璃珠实现均匀分散；必要时低温升温降黏。
  
• 混匀后立即做 T0，并进行均匀性抽检（多点计数，≤0.3 log10 差）。
  
• 分装到独立容器对应 D7/D14/D28（首选）；或制定多点合并取样方案并固定位点。
  
• 全程按质量取样；使用正位移移液器/无菌取芯器。
  
• 事先完成并归档中和/回收验证与干扰验证。
  
• 取样后立即中和/回收；共桶方案每次开启 <2 min，及时封口。
  
  

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hlmxjzb@163.com

上面是AI说的吧

为了微生物

hlmxjzb@163.com 发表于 2025-8-25 17:15
上面是AI说的吧

直接黑名单，我看都看不到

vavayqing

为了微生物 发表于 2025-8-26 11:09
直接黑名单，我看都看不到

怎么拉黑名单？

为了微生物

vavayqing 发表于 2025-8-26 11:15
怎么拉黑名单？

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