菌液浓度确认、菌悬液制备

大橙子Cecelia

想要请教各位老师一些问题：因为我们买的是二代菌，说明书上写直接加复溶液溶解划线就可以了，在琼脂斜面上培养后就是三代了，那我这个三代的菌是不是就是药典1105表一里试验菌液的制备那一栏的一步？然后直接用接种环沾斜面上的菌，用0.9%氯化钠稀释成各个浓度的菌悬液？还是说要先取斜面上的菌到tsb里培养一天之后，再取培养后的tsb用氯化钠稀释？
然后再做各个菌种的浓度确认（1105和1106关于菌液的制备哪一项是一样的吗，参考哪个都行吗？），各个稀释级的菌悬液取1ml加入tsa培养（白念、黑曲都可以用tsa吗，还是说用sda），这个培养时间和温度有具体的范围吗，应该是18-24h（按照传代或者是菌液制备的温度来？）？还是有别的要求？
求各位老师帮忙解答，万分感谢！

诺诺ヘ

1.斜面上沾一环到生理盐水就是菌悬液了，稀释后使用
2.斜面到tsb培养1天就变成4代菌了
3.黑曲和白念tsa和sda都可以培养出结果，TSA 30-35℃ 3-5天，SDA 20-25℃ 5-7天

大橙子Cecelia

诺诺ヘ 发表于 2025-11-3 17:06
1.斜面上沾一环到生理盐水就是菌悬液了，稀释后使用
2.斜面到tsb培养1天就变成4代菌了
3.黑曲和白念tsa和 ...

好的我明白了，感谢老师解答

大橙子Cecelia

诺诺ヘ 发表于 2025-11-3 17:06
1.斜面上沾一环到生理盐水就是菌悬液了，稀释后使用
2.斜面到tsb培养1天就变成4代菌了
3.黑曲和白念tsa和 ...

老师我还有个问题，如果我要做sda的适用性检查，那提前确认100cfu/ml白念和黑曲的浓度也必须要用sda来做吗？还有就是这个菌液浓度是每次做试验都要提前确认，还是可以传代一次做一次

诺诺ヘ

大橙子Cecelia 发表于 2025-11-6 10:55
老师我还有个问题，如果我要做sda的适用性检查，那提前确认100cfu/ml白念和黑曲的浓度也必须要用sda来做 ...

最好是用对应的计数培养基确认菌液浓度
菌悬液制备也算技术活，可能新手前期把握不准，就需要多次确认，熟练之后每次传代做一次就好但是每次实验也是要进行计数确认实验有效的

大橙子Cecelia

诺诺ヘ 发表于 2025-11-6 14:04
最好是用对应的计数培养基确认菌液浓度
菌悬液制备也算技术活，可能新手前期把握不准，就需要多次确认， ...

那是不是说假如我做的大肠是10的6次方1ml里含菌量不超过100，每次做控制菌检查的阳性对照稀释成6次加1ml到tsb里，然后再用这个6次的加到平板里培养看是不是不超过100，这样理解是对的吗

诺诺ヘ

大橙子Cecelia 发表于 2025-11-6 16:18
那是不是说假如我做的大肠是10的6次方1ml里含菌量不超过100，每次做控制菌检查的阳性对照稀释成6次加1ml ...

对的，是这个意思

路过一只蚂蚁

真心建议买定量菌株，传代一般还是做环境菌库的菌株保留为主，像这种能买到的，还是定量菌株吧，不然审计问题不少，要专业度不够可能会被问成缺陷的

大橙子Cecelia

路过一只蚂蚁 发表于 2025-11-6 18:23
真心建议买定量菌株，传代一般还是做环境菌库的菌株保留为主，像这种能买到的，还是定量菌株吧，不然审计问 ...

老师我们在25版药典之前是买的定量菌，但是现在不是说每灭菌批次都要做一次适用性检查么，领导觉得定量的不划算太贵了就买二代的了