【求助】纯化水微生物限度

Szzzzzz

我们公司于2025年11月11日开始做了个新纯化水系统的验证，使用真空泵连接硅胶管以及滤瓶负压过0.45μm滤膜抽滤，32.5℃~32.7℃培养了5天，然后今天下午去观察的时候发现以下几点问题：1、我们的这个R2A培养基，采购的成品的培养基已经干燥完了，边缘以及滤纸的边缘都有焦黄色，不知道是否是我们温度不合格还是滤纸造成的？
2、我们观察的所有菌落几乎不明显，且有些菌落模糊，明显的呈现粉红色点状菌落，且滤膜的边缘会又一圈白色的菌落？不知道是我们的方式是否有问题，期间使用的灭菌方式为121℃；15分钟湿灭的器具以及蒸馏水【自制无菌水】；
3、我们纯化水系统的消毒方式为臭氧每月度进行一次系统消杀。
4、对照培养的菌落生产情况也

fanzz19880326

培养基干了，看看是不是湿度不够

Szzzzzz

fanzz19880326 发表于 2025-11-17 17:29
培养基干了，看看是不是湿度不够

我也是这样觉得，湿度过低，准备下次取点蒸馏水放底层补点湿度

jinn512

2个结论，一个是你们把培养基放到正对培养箱风口的地方了，一直吹肯定会干的，第二个，你们好像把滤膜贴反了，这种没有栅格的滤膜很容易出这个问题。或者操作不对，菌长膜底下了。麻烦别问我怎么知道的，这是我的来时路

八档丶电风扇

1、培养基的问题、可能存放时间过长导致水分流失；
2有些菌落模糊，明显的呈现粉红色点状菌落，P2A是寡营养培养基、菌落在培养基上的生长是缓慢的，所以大多数菌落在R2A上面生长菌落都会很小；滤膜的边缘有一圈白色的菌落大概率是滤杯和滤膜没有压紧，导致有纯化水漏到边边了，也有可能是没有抽滤干；

Szzzzzz

jinn512 发表于 2025-11-17 18:02
2个结论，一个是你们把培养基放到正对培养箱风口的地方了，一直吹肯定会干的，第二个，你们好像把滤膜贴反 ...

感谢指教

Szzzzzz

八档丶电风扇 发表于 2025-11-18 09:09
1、培养基的问题、可能存放时间过长导致水分流失；
2有些菌落模糊，明显的呈现粉红色点状菌落，P2A是寡营 ...

好的感谢指教

香香rnw

还有你的器具，水质的高压灭菌时间是不是短了，一般器具是121℃，30min，培养基的话是15min

Szzzzzz

香香rnw 发表于 2025-11-18 09:38
还有你的器具，水质的高压灭菌时间是不是短了，一般器具是121℃，30min，培养基的话是15min

好的感谢指教，回头试试，我们都是15分钟灭的器具

hhhhhhjjjjj

Szzzzzz 发表于 2025-11-17 17:38
我也是这样觉得，湿度过低，准备下次取点蒸馏水放底层补点湿度

没用的，我试过，还是干。后来我是直接套一个大袋子，把平板放里面，袋子敞开口，隔离风口

Gigiocy

你们有呼吸袋吗？可以用袋子装好倒置培养试试看

不见猫骨头

第一个问题，R2A边缘干燥，可能是你把培养基放在培养箱边缘位置，那个位置气流比较大，水分挥发比较快，往中间一点就好了
第二个问题，这个菌落应该是水系统特有的菌落，应该是水系统内有死水，新的水系统一般不会出现，可能是你们安装好后长时间没事使用导致的或者管路中的水没有循环，导致有生物膜；具体原因需要你们自己调查，但应该不是你们灭菌方式的问题，不过器具和蒸馏水按照121℃30min也没问题
第三个问题，如果是正常情况下，一个月臭氧一次没问题
第四个问题，可能是没有抽滤完全，建议等滤杯中的水过滤完全后再抽滤大概1min，情况会有所改善

18913555243

图1.菌落模糊是菌落含菌量较大。要知道温度和滤纸是否有问题，温度问题：可以多放几个校准过的温度计；滤纸就查看空白对照组。
图2.培养基放培养箱的位置要换换。
图3.微限仪是哪种？一次性使用的塑料杯还是重复使用的金属杯？要是塑料杯的话，就是使用后没要烧到位。要是金属杯就是橡胶圈没压好。造成滤膜外有一圈被污染了。

永恒12

第二图，对照培养基看着也长了菌额，问题不小

whqiang78

Szzzzzz 发表于 2025-11-17 17:38
我也是这样觉得，湿度过低，准备下次取点蒸馏水放底层补点湿度

实验前滤膜浸泡了多长时间？

Szzzzzz

18913555243 发表于 2025-11-18 13:55
图1.菌落模糊是菌落含菌量较大。要知道温度和滤纸是否有问题，温度问题：可以多放几个校准过的温度计；滤纸 ...

我们是那种真空泵，外接硅胶管连接滤瓶，滤瓶的口子位置可以放置一张滤膜，每次都是滤前用无菌水浸润后放上去过滤

18913555243

18913555243 发表于 2025-11-18 13:55
图1.菌落模糊是菌落含菌量较大。要知道温度和滤纸是否有问题，温度问题：可以多放几个校准过的温度计；滤纸 ...

我知道，一个一个做样的。跟这种差不多吧。

yhgz

多谢分享