不要传代！不要传代！不要传代！

沁人绿茶.

引子：药典中标准菌株要求传代次数不得超过5次。同时也提到要增加环境分离菌的使用，那环境分离菌也是按照传代次数要求来内部管理吗？

阅读部分参考文献，以下是梳理其核心价值、关键争议与正确使用规范，供你参考。文章标题创意来自刘慈欣小说《三体》，希望能引起你的注意。

一、环境分离菌的核心应用价值

环境分离菌作为制药生产环境（洁净室、水系统、原材料等）微生物群的真实代表，其价值在不破坏“野生”特性的前提下充分凸显，具体体现在三方面：

• 提升质量控制的针对性与可信度：环境分离菌已适应生产环境中的应激因素（如营养缺乏、消毒剂、渗透压胁迫、紫外线照射等），比标准试验菌株更能反映实际污染风险，可有效补充标准菌株的局限性，增强培养基促生长试验（GPT）、消毒剂效能研究、抗菌有效性测试等的稳健性与真实性。
• 契合监管合规要求：《欧盟药品生产质量管理规范（EU GMP）附录1》明确建议在培养基灌装材料的促生长试验中使用代表性本地分离株，美国FDA也通过483表观察报告和警告信强调其在微生物检测中的必要性，合规使用可避免监管风险。
• 助力污染溯源与控制措施优化：未经过度传代的环境分离菌保留了原始污染来源的微生物特征，可通过其表型、分子特征追溯污染路径，为清洁消毒程序调整、环境监测方案优化提供精准依据。
  

二、核心质疑：传代难题与应用分歧

环境分离菌的应用争议集中于“传代相关问题”与“生长促进试验应用分歧”两大维度，也是其标准化推广的主要障碍：

• 标准化难度大，跨实验室对比困难：环境分离菌的“野生”特性具有强地域性和环境特异性，不同实验室的分离来源、培养条件差异本就存在，而传代过程会进一步放大这种差异，导致菌株生长特性、表型特征不一致，无法形成统一的检测评价标准。
• “野生”特性稳定性存疑：在营养丰富的实验室培养基上连续传代，会推动菌株进化，使其逐渐丧失对生产环境的应激适应能力，原本的污染预警价值大打折扣；且目前对这些独特表型的流失速度尚未完全明确，进一步增加了检测结果的不确定性。
• 生长促进试验中的应用分歧：关于环境分离菌是否应纳入培养基生长促进试验，行业内存在明显分歧。支持方认为，环境分离菌是培养基性能的最佳挑战者，能更真实地反映培养基对实际生产环境微生物的支持生长能力，尤其适用于无菌检测验证等关键环节。反对方则提出两点核心质疑：一是分离菌在实验室培养（含传代）过程中会逐渐适应人工环境，其生物学特性可能发生改变，不再完全等同于原始环境中的微生物；二是环境分离菌本身就是通过目标培养基分离获得的，已证明其在该培养基上的生长能力，重复进行生长促进试验属于资源浪费。 你支持哪一方？欢迎留言表明态度！
  

三、正确使用要求（以“减少传代”为核心）

环境分离菌的正确使用需遵循“明确依据、规范保存、精准应用”三大原则：

• 明确选择依据：使用前需明确菌株的预期用途，确保分离株与检测目标高度匹配——例如环境监测培养基的GPT试验应纳入环境监测系统相关分离株，无菌检查培养基的GPT试验需纳入无菌检查失败或培养基灌装失败相关分离株；
• 优化保存方式：采用超低温冷冻（-80℃）结合保护剂（如甘油、二甲基亚砜）的方式保存原始菌株，分装为多份冻存管，单次使用后直接丢弃，避免反复复苏传代。
• 精准匹配应用场景，避免滥用：仅在与生产环境直接相关的微生物检测中使用，例如环境监测、无菌工艺模拟、污染事件溯源等；生长促进试验中需结合科学评估决定是否纳入，不用于通用型方法验证或与生产环境无关的微生物试验，确保菌株应用的针对性。
  

参考文献：1. Environmental Isolates: What's The Proper Use Of In-House Cultures?, Pharmaceutical Online, June 24, 20192. The Use of In-House Microbial Isolates in Media GPT: Challenges and Solutions. Amer. Pharm. Rev. 2021, 24 (4), 36–39.3. Role of in-house isolates in pharmaceutical quality control，European Pharmaceutical Review，27 November 2023

准圣级药老

环境分离菌，那不是人为选择该体现哪个么

羽遥

感谢楼主分享，进来学习一下

joseph666

分析精准，路过学习

为了微生物

现在的文章一股AI味

优秀的QA

我还以为不要传宗接代呢