高效液相色谱仪方法建立的问题

威化饼m27

您好，想请教一个关于高效液相色谱分析方法设置的问题，希望能理清逻辑并获得专业建议。

核心问题： 在样品分析中，当杂质出峰时间远长于主成分时，如何设置采集时间更为合理且合规？

具体情况描述：

1. 对照品分析： 目标主成分的出峰时间约为 9分钟。
2. 样品分析： 样品中存在杂质，需要约 40分钟 色谱基线才能完全恢复平稳，以确保杂质峰被完整采集。

目前考虑的两种方案：

· 方案一（单一方法）： 为对照品和样品建立并使用同一个分析方法，将采集时间统一设置为 40分钟。
· 方案二（两个方法）： 建立两个独立但色谱条件（如流动相、流速、色谱柱等）完全一致的方法，仅采集时间不同：
  · 对照品方法： 采集时间设为 10分钟（足以覆盖主峰）。
  · 样品方法： 采集时间设为 40分钟（确保杂质峰被完全采集）。

希望探讨的要点：

1. 技术可行性： 上述 方案二 在技术上是否可行？即仅改变采集时间，而其他所有色谱参数保持一致，这种做法在分析逻辑上是否成立？
2. 合规性质疑： 方案二（为同一种物质的对照品和样品使用不同采集时间的方法）是否可能被视为一种 “违规操作” 或存在合规风险？例如，在药品、食品或环境等受法规监管的领域，这是否会影响到方法验证、数据完整性或审计追溯的要求？
3. 实践建议： 从最佳实践角度，哪种方案更受推荐？如果方案二存在疑虑，通常应如何妥善处理此类主成分与杂质保留时间差异大的情况？

期待各位专家能从技术规范、法规符合性及实验室常规操作等角度分享见解。感谢！

药徒

方案二不可行，对照品中也应有杂质对照出峰哇

baoyier831213

方法经过验证就可以用第二种方案，对照溶液运行时间的变更不影响最终检测就行

羽遥

方案一；
反正我是没见过对照和供试品的方法不一样的，即使是运行时间；
如果你是研发，平时内部检测小试样品，方案二可以；
若你是QC或者申报；方案二有因使用两套不同采集时间方法而引发的数据完整性与科学性质疑。

苦练叉腰肌

我没看懂为什么要有方法二。而且检测都是仪器做的，又不要人，设置10分钟结束有什么意义呢？

wushihao

JP药典方法有对照和样品采集时间不一致的，但方案二需要改进，对照品的运行时间应该为对照RT的2倍，即使20min，样品还是40min。但是国内方法的还没见过这种形式

馨如xinru

应该选方案一，一般都要求同一个序列的采集方法是同一个。

Menkcll2ci

方案二可行，验证时证明对照品10分钟后无杂质峰，否则未洗脱杂质峰影响样品峰面积。将方法参数写入SOP。

威化饼m27

苦练叉腰肌 发表于 2026-1-16 14:23
我没看懂为什么要有方法二。而且检测都是仪器做的，又不要人，设置10分钟结束有什么意义呢？

这是打的比方，实际上对照品17分钟出峰，样品要2小时，太久了，小厂，色谱仪没那么多，老板又要催报告。

威化饼m27

Menkcll2ci 发表于 2026-1-18 11:14
方案二可行，验证时证明对照品10分钟后无杂质峰，否则未洗脱杂质峰影响样品峰面积。将方法参数写入SOP。

没有经过方法验证的话，还是只能用方案一对吧

威化饼m27

药徒 发表于 2026-1-16 13:22
方案二不可行，对照品中也应有杂质对照出峰哇

没有杂质啦，很干净了

威化饼m27

baoyier831213 发表于 2026-1-16 13:26
方法经过验证就可以用第二种方案，对照溶液运行时间的变更不影响最终检测就行

感谢指导，没有经过方法验证就不可以用哈

秦歌

看你这样子是有关物质，非含量，有关物质保留时间一般为主成分的2到2.5倍，至于最后的尾杂，是确定的已知杂质还是未知杂质，有多大面积？没这些数据不能判断

老白mmz

首先要看你做的是什么，含量还是杂质，但无论做的是哪个，都必须保持运行时间一致，必须跟方法开发时的结果一样：
1、含量的话你可以都跑10分钟，到样品的时候选择延长30分钟进样，这30分钟不采集图谱只用流动相冲柱子，保证柱子里没有杂质。
2、杂质的话有信心可以在开发时设置梯度，运行过程中改变流动相的流速或配比，快速把后边杂质跑出来可以节约整体时间，否则就老老实实都给跑满时间吧。

416301116

方法一比较稳妥，方法二我们申报有一个批准的，还有有一个被发补改成方法一了。其实CDE还是挺教条的，和老师的个人审评尺度也有很大关系，这个主观性很强，讲道理如果是标准品的话，本身杂质就很小了，还要稀释很多倍，一般情况下，至少是100倍，怎么可能还看的到杂质呢，虽然我比较想用方法一，但现实就是要求用方法二。

416301116

如果要真的非常纠结这个时间的问题，最好的办法还是调整方法，那方法肯定是要大改的

门门

个人建议：
1若是流动相梯度条件，就全都全时间，省得扯皮。你看这么多层回答，好几个扯皮的，费那劲干嘛！
2若是流动相等度条件，就给对照（对照品）溶液，主峰出峰就完事，仅供试品溶液全时间即可。谁要是说不可以，你骂他（权威专家除外，不要骂权威专家，若不是权威专家，无论他说什么，让他滚。至于何为权威专家，你自己定义，例如我不是，我滚了）。

门门

羽遥 发表于 2026-1-16 13:36
方案一；
反正我是没见过对照和供试品的方法不一样的，即使是运行时间；
如果你是研发，平时内部检测小试 ...

“数据完整性与科学性”
嘿嘿。
若是没人问，大概率也没人看得出来。
所以，科学个屁。别扯淡吹科学，真给科学掉价！ 至于数据完整性，嘿嘿吧。
我的答案在第17楼。

CP0

建议你从色谱条件入手进行有效分离，对照品峰与样品峰出峰时间要一致才能确保样品中所含的成分有对照品峰是一致的。

txw

有没有一种可能，在方案一的基础上设置梯度洗脱，以减少进样时间