初始污染菌回收率

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器械的初始污染菌回收率怎么做呀，薄膜过滤法，求各位大佬指导

逸马杀犬于道

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# 医疗器械初始污染菌回收率试验方案（薄膜过滤法）
## 1 试验目的
验证采用**薄膜过滤法**检测产品初始污染菌时，方法的**回收率**是否符合要求，确认该方法适用于本产品微生物总数的测定。

## 2 依据标准
- GB/T 19973.1‑2023 医疗器械的灭菌 微生物学方法 第1部分：产品上微生物总数的测定
- 《中国药典》微生物计数法（薄膜过滤法）
- 企业内控微生物检验规程

## 3 试验菌株（至少 3 株）
1. **金黄色葡萄球菌** ATCC 6538
2. **铜绿假单胞菌** ATCC 9027
3. **枯草芽孢杆菌** ATCC 6633
（可根据产品风险增加白色念珠菌、黑曲霉）

## 4 仪器与耗材
- 无菌薄膜过滤器（滤杯+滤膜）
- 无菌滤膜：孔径 **0.45 μm**，直径 47 mm
- 无菌洗脱液：0.9%无菌氯化钠溶液、pH7.0 无菌缓冲液
- 胰酪大豆胨琼脂（TSA）、胰酪大豆胨液体培养基（TSB）
- 无菌剪刀、无菌镊子、无菌均质袋/无菌烧杯
- 生物安全柜、恒温培养箱

## 5 菌液制备
1. 取标准菌株新鲜培养物，用**无菌生理盐水**制成菌悬液。
2. 稀释至：**每份接种量 10～100 cfu/份**。

## 6 试验分组
1. **样品组**：产品 + 接种菌液 → 洗脱 → 薄膜过滤 → 培养 → 计数
2. **对照组**：直接过滤等量菌液 → 培养 → 计数（作为理论菌数）
3. **阴性对照组**：不加菌，同法操作，应无菌生长

## 7 操作步骤（核心）
1. **样品准备**
   取**至少 3 份**完整产品（或代表性部位），置于无菌均质袋/无菌容器中。

2. **接种**
   用移液枪取**10～100 cfu** 菌液，**均匀接种**于产品表面（重点区域：内腔、缝隙、螺纹、粗糙面）。
   室温吸附 **30 min**。

3. **洗脱**
   加入**足量无菌洗脱液**（以能浸没/充分冲洗产品为准），
   振荡/揉搓/超声/搅拌 **≥5 min**，使微生物充分洗脱。

4. **薄膜过滤**
   - 取全部洗脱液（或定量体积）通过**滤膜**过滤。
   - 过滤完后，用**无菌生理盐水**冲洗滤膜内壁 2～3 次，消除产品抑菌成分干扰。
   - 取出滤膜，**菌面朝上**贴于 TSA 平板。

5. **培养**
   细菌：**30～35 ℃ 培养 3～5 天**
   真菌：**23～28 ℃ 培养 3～5 天**

6. **计数**
   记录样品组菌落数、对照组菌落数。

## 8 回收率计算
\[
\text{回收率（\%）} = \frac{\text{样品组平均菌落数}}{\text{对照组平均菌落数}} \times 100\%
\]

## 9 合格判定
- 每株试验菌回收率在 **50% ～ 200%** 范围内，判为方法适用。
- 阴性对照应**无菌生长**。

## 10 试验记录内容
- 产品名称、型号、批号
- 菌株名称、代次、接种量
- 洗脱方式、过滤时间、冲洗次数
- 各组菌落数、回收率计算结果
- 试验人、复核人、日期

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如果你告诉我：
- 你是什么**器械**（植入/无菌/导管/骨科）
- 有没有**抑菌性**
- 要做**几株菌**

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补充内容 (2026-2-13 09:28):
那必须的，现在ai写这种成熟的方案报告又快又好

mxl12325

分三组，供试品组，供试品阳性组，阳性对照组。
我是五种菌都做了回收率，最后平均值用作计算校正因子，看你需求选择菌种， 但最好不少于两种。
用不大于100CFU菌液接种供试品薄膜过滤为供试品阳性组，供试品薄膜过滤为供试品组，同浓度菌液过滤为阳性对照组。
计算方式回收率=（供试品阳性组-供试品组）/阳性对照组。问道回收率我默认认为做过计数方法适用性了。所以内容不多赘述了。

刘亚运lyy

参考GB/T19973.1,有两种方法，一种是重复回收法，一种是产品接种法，可以去看下标准，有详细介绍