多肽实验中的基本流程

合肥国肽生物

一、实验前准备

• 选择树脂：如 Rink Amide、Wang 树脂
• 保护氨基酸：Fmoc-AA-OH（氨基 Fmoc 保护，侧链 tBu/Boc 等保护）
• 缩合试剂：HBTU/HOBt 或 TBTU、DIPEA
• 溶剂：DMF、DCM、甲醇
• 脱保护剂：20% 哌啶 / DMF
  

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  二、固相多肽合成 6 步循环（每接一个氨基酸）
1. 树脂溶胀
树脂加入 DCM/DMF，静置 20–30 min，充分溶胀，洗涤。

2. 脱 Fmoc（脱氨基保护）

• 20% 哌啶 / DMF 处理 2 次（3 min + 7 min）
• DMF 洗涤 4–6 次，除去哌啶
• 检测：茚三酮显色（变蓝＝游离氨基，脱保护成功）
  

3. 氨基酸缩合（接肽）

• 配比：Fmoc-AA + HBTU + DIPEA（1:1:2 当量）
• 室温反应 20–60 min
• DMF 洗涤
• 茚三酮检测（不显色＝缩合完全；显色＝需二次缩合）
  

4. 封端（可选）
未反应游离氨基用乙酸酐封闭，减少杂肽。

5. 重复循环
继续：脱保护 → 缩合 → 洗涤…… 直到整条肽链合成完毕。

6. 最后脱保护、切割（切下树脂 + 去侧链保护）

• 用 TFA 切割液（TFA + 水 + TIS 等）
• 室温切割 2–4 h
• 将肽从树脂切下，同时去掉所有侧链保护基
  

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  三、后处理与纯化

• 沉淀：冰乙醚沉淀多肽，离心
• 洗涤：乙醚洗 2–3 次，除 TFA 和杂质
• 溶解：水 / 乙腈溶解粗肽
• 纯化：HPLC 反相纯化
• 冻干：得到纯多肽粉末
• 鉴定：MS（质谱）+ HPLC + 氨基酸分析
  

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  四、简单总结（口诀）
溶胀 → 脱保护 → 洗 → 缩合 → 洗 → 循环 → 切割 → 沉淀 → 纯化 → 冻干

五、关键注意点（实验常翻车处）
1 无水、避光、反应充分，防止消旋
2 每次必须洗净，残留哌啶会影响缩合
3 长肽容易缩合不完全，需要延长时间 / 换缩合剂
4 TFA 有毒、腐蚀性强，操作要通风
国肽生物拥有成熟的长肽合成工艺，能够根据客户定制的多肽序列，快速有效地设计合成方案并迅速开始合成，更快更好的为客户提供所需的服务是我们不变的坚持。
国肽生物主要提供：多肽合成、多肽定制、同位素标记肽、人工胰岛素、磷酸肽、生物素标记肽、荧光标记肽（Cy3、Cy5、Fitc、AMC等）、目录肽、偶联蛋白（KLH、BSA、OVA等）、美容肽、化妆品肽、多肽文库构建、抗体服务、糖肽、订书肽、药物肽、RGD环肽等。
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学习了，谢谢提供分享。