FDA药品及生物制品的分析方法和方法验证指导原则草案

一沙一叶

FDA药品及生物制品的分析方法和方法验证指导原则草案

前言

本指导原则草案，定稿后，将代表美国食品和药物管理局（FDA）目前关于这个话题目前的想法。它不会创造或赋予或任何人的任何权利，不约束 FDA 或公众。您可以使用另一种方法，如果该方法符合适用的法律和法规的要求。如果你想讨论一个替代方法，请与FDA工作人员负责实施本指南。如果你不能确定适当的FDA 工作人员，请拨打本指南的标题页上所列的电话号码。

介绍：

该修订指南草案将取代行业 2000 年的指导分析方法和方法验证草案，并最终确定后，也将取代 1987 年美国 FDA 行业指南《提交的样品和分析数据的方法验证》。该草案提供了有关申请人如何提交分析程序和方法验证数据来支持说明原料药和制剂具有强度、质量、纯度和效用的文件。它会帮你收集信息和现有数据来支持你的分析方法。该指导原则适用于原料药和制剂产品涵盖新药申请（NDA），简化新药申请（仿制药），生物制品许可申请（BLA），以及这些申请的补充申请。在这个修订草案指导原则也适用于原料药和制剂产品涵盖二类药物主文件（DMFs）。

该修订指南草案补充了国际协调会议（ICH）Q2（R1）指导原则《分析程序的验证：开发和验证的分析方法 Q2（R1）和方法的文本。

该修订指南草案不涉及研究性新药申请（IND）方法验证，但研究者在准备研究性新药申请时应考虑该指导原则中的建议。研究性新药申请需要在研究的每个阶段有足够的信息，以确保正确鉴别性，质量，纯度，强度和/或效力。对分析方法和方法验证的信息量将随研究中不同阶段而变化。有关分析程序和需提交的阶段方法验证资料方面的指导意见的研究中，申请者可以参考 FDA 的指导原则《Ⅰ期研究药物的 IND 的内容和格式，包括性状、疗效和生物技术衍生产品》。

一般考虑在第三阶段的研究进行之前，分析方法和分析方法验证（例如，生物测定）是在 FDA 行业指导原则《人类药物和生物制剂、化学、制造、控制信息会议》。

该修订指南草案不涉及生物和免疫化学检测的表征和许多原料药和制剂产

品质量控制的具体方法验证的建议。例如，一些基于动物模型的生物测定，并且免疫原性评估或其它免疫测定具有独特的特征，应开发和验证过程中予以考虑。

此外，需要对现有的分析方法再验证时可能需要在制造过程中产品的生命周期的变化予以考虑。有关适当的验证方法的分析程序或者提交本指南中未提及的信息的问题，您应该向用 FDA 产品质量评审人员咨询。

如果您选择了与本指导草案中不同的方式，我们建议您在提交申请前与相应的FDA 产品质量评审人员讨论。

FDA 的指南文件，包括本指导原则，不具有法律强制性的责任。相反，指南描述的是 FDA 对某个主题目前的想法，并应仅作为建议，除非有明确的法律或法规要求的引用。使用“应该”这个词在 FDA 指南意味着什么建议或推荐，但不是必需的。

II. BACKGROUND背景

每个 NDA 和 ANDA 都必需包括必要的分析程序，以确保原料药和制剂的鉴别，强度，质量，纯度和效果.每个 BLA 必须包括完整的制造方法描述，包括能够确保产品身份、质量、安全、纯度和有效的分析程序。数据必须能够用于建立满足精度和可靠性标准的分析方法并适合与拟定目的.对于 BLAs 及补充补充，分析方法和方法验证是许可证申请或补充申请必须提交的一部分，并通过美国 FDA质量评审小组进行评估。

分析方法和验证资料应当按照 ICH M2 eCTD 的相应部分提交。

当一个分析程序作为 NDA，ANDA 或者BLA 的一部分被批准时，它就变成了FDA 获批药品的获批分析程序。这个分析程序可能源于 FDA 认可来源（如源于USP/NF 的药店程序）或者是一个提交的已被认定通过美国 FDA 可以接受的经验证的程序。应用一个分析方法到不同的产品，需要考虑对新产品进行适当的验证研究。

III. ANALYTICAL METHODS DEVELOPMENT 分析方法开发

分析方法的开发是为了一个定义药物原料药与制剂产品特性的检测标准。新方法开发初期，应当基于分析项目与方法适用范围选择检测仪器和检测方法。该方法可在开发过程中进行专属性，线性，检测限（LOD）和定量限（LOQ），范围，精度和准确度的评估。

在方法开发过程的早期阶段，方法的稳定性应进行评估，因为这个特性可以帮助您确定哪一种方法您将提交审批。在发展的早期阶段分析程序最初开发基于基本方法和以往的经验机理认识的结合。早期程序的实验数据可用于指导进一步发展。你应该在方法验证部分中提交支持该方法的有效性的发展数据。

要充分认识在变化在分析过程方法参数的影响，你应该采取的方法的稳定性研究（例如，实验方法参数设计）的系统方法。你应该从风险评估开始，并跟进多因素实验。这些方法能让你了解到方法性能参数因子的影响。检测方法的性能评价贯穿了样品生产的整个过程。在研究专属性过程中获得的知识可以帮助你评估方法的性能。

IV. CONTENT OF ANALYTICAL PROCEDURES 分析程序内容

你应该说明分析过程中足够的细节，让主管分析师重现的必要条件，并提出验收标准范围内得到结果。您还应该说明需要特别注意的分析程序问题。如果所参考的分析方法未经过修改超出了已发布方法的允许，需引用 FDA 认可的来源（如：USP  / NF，分析师协会（AOAC）国际）。你应提供详细的从其他出版来源的程序。以下是重要的信息，你应该包括一个分析程序的列表：

A. 原则/范围

分析测试/技术（分离，检测等）的基本原理的说明;目标分析物和样品（S）型（如，药物，药品，生物体液等杂质或化合物）。

B. 仪器/设备

所有需要的合格的设备和部件（例如，仪器类型，检测器，柱子类型，尺寸，过滤器类型等）。

C. 操作参数

合格的最佳设置和范围（可予以调整）对分析至关重要（比如，流速，组件的温度，运行时间，顶空进样器、检测器的设置）。如果适用实验配置和集成参数的绘图也可以使用。

D.  试剂/标准

以下应列出：  

•化学的等级（例如，USP / NF，美国化学学会，高效液相色谱级，或气相色谱级）。  

•来源（例如，参照美国药典标准或合格的内部参考材料）。  

•状态（例如，干燥，未干燥等）及浓度。

•标准纯度（纯度校正因子）。

•存储控制。

•安全使用说明书（按目前的安全数据）。  

•验证或可用的保质期。

生物试剂，如单克隆抗体，多克隆抗体，或细胞，资格审查程序中队新的批次有一定的资格限制。

E.  样品制备  

样品制备过程（例如，萃取法，稀释或浓缩，混合超声脱盐过程，振摇或超声处理的时间等） 单方和复方检测时的溶解浓度（如，微克/毫升或毫克/毫升），以及溶液储存的稳定性信息。

F.  标准对照品溶液的制备

所有标准对照品溶液的配制方法和储存条件，包括校准标准，内部标准，系统适用性标准等。

G.  程序  

一步一步的描述分析方法（例如，平衡时间，空白对照，安慰剂，样本，控制，灵敏度溶液（杂质的方法）和样品分析的系统适用性），以及工作范围的调整。

H.  系统适用性  

确证试验（次）的程序和参数，以确保系统（分析设备，电子及操作）将作为一个系统在使用的时候正常工作。适用于标准和控制，如峰拖尾，精密度和分离度。对于色谱系统的系统适用性，是指在色谱方法的验证和USP通则<621>色谱评审指导。

I.  计算  

用于基于标签要求和测试（例如，检测，指定和非指定杂质和相对影响因子）的积分方法和有代表性的计算公式进行数据分析（标准品，质控，样品）。这包括用于数据分析的数学转换或公式的描述，以及使用一个科学的校正因子。

J.  数据报告  

一个演示数字数据是与仪器的功能和验收标准是一致的。该方法应说明什么格式来与所需显著数字的具体数量报告结果（例如，百分比标签要求，重量/体重，重量/体积等）。在美国测试和材料协会（ASTM）E29描述了使用显著位数的测试数据，以确定是否符合规范的标准做法。对于色谱方法，你应该包括保留时间（RT）识别与参考标准比较的基础上，相对保留时间（RRTS）（已知和未知杂质）可接受的范围和样本结果报告标准。

V. 参考标准和教材

一级和二级参考标准和材料的定义，并讨论以下ICH指导原则：Q6A规格：新原料药和新制剂的测试程序和验收标准：化学原料（  ICH Q6A  ），Q6B规格：生物技术/生物制品的测试程序和验收标准，活性药物成分和Q7优良制造规范指南。对于所有的标准，应该确保适用性。原料药的标准建立中验证专属性的鉴别试验尤为关键，要严格按照存储，使用条件的参考标准操作，以避免增加杂质导致分析处理不准确。对于生物制品，应当包括支持您打算在以后的年度报告参考的参考标准资格和材料的信息。支持参考标准和材料包括鉴定试验方案，报告和分析证书（如果可以，应包括协议和相关的已知杂质的信息）。

参考标准通常可以从美国专利获得，也可以通过欧洲药典，日本药典，世界卫生组织，或标准和技术研究所提供。我们可以从美国药品与生物制品中心找到关于生物制品的参考标准。对于在美国销售的生物制品，在上市之前必须参考美国药品与生物制品中心的标准。其他来源的参考资料，必须以ICH Q6A常规与非常规测试结果为参考。你应该考虑正交方法，进一步的测试可以包括材料的属性来确定其适应性（例如，更广泛的结构同一性和纯度和杂质的正交技术，生物活性）。

对于生物参考标准和材料，我们建议您遵循两个层次的方法检验的新参考标准，可以帮助防止不稳定的质量属性，并提供长期的链接，临床试验材料。一个两层的方法涉及用一个基本参考标准与每个新的工作参照标准进行比较，因此它是临床试验材料和当前的制造工艺的链接。

VI.  分析方法验证用于新药，仿制药，生物制品，和药物主文件  

A.非药典分析方法  

分析方法验证是论证某一分析方法适用于其预期目的的过程。分析程序的方法和目标应明确界定，并启动明确的验证研究。这种方法是以科学为基础的方法开发和优化研究中获得。验证数据产生于被证实的草案中对生产实践所采取的特征性试验方法、合理的验收标准、规范的仪器操作。该关于药物原料、制剂分析及复方制剂分析的协议应当根据各自的特性执行并完善。ICH Q2（R1）被认为是对分析方法验证的特性建议和定义主参考。美国食品药物管理局审稿指南：色谱方法的验证是可用的。

B.验证特性  

虽然不是所有的验证特性适用于所有类型的测试，验证的典型特征是：

&#8226;专属性

&#8226;线性

&#8226;准确度

&#8226;精确度（重复性，中间精密度和重现）

&#8226;范围

&#8226;定量限

&#8226;检测限

稳定性指示分析即为一个定量分析方法的程序，可以检测出在储存过程中的药物物质和药物产品的质量属性（S）的变化。表现出稳定性指示测定的特异性，应进行干扰实验。包括使用的样品加入标靶分析物和所有已知的干扰杂质，实验室试制样本，和实际产品样本（由最终制造过程生产的），或者是加速试验样品。作为新药、仿制药、生物制品的申请者，则必须：（1）提交用于建立该分析方法的符合精度和可靠性的适当标准的检测数据。（2）通知FDA的在申请成立以后的每个修改，包括对分析程序、控制变化的应用程序及方法等。所提交的数据应包括从该方法的开发到方法验证研究的稳定性数据。

C.药典分析方法

某一分析方法的适用性（如USP / NF，AOAC国际方法学图书，或其他认可的参考标准）应在实际使用条件下进行验证。药典一般章节会比较复杂，为了达到预期使用和验证目的，应当将多个步骤、地址或多种技术合理化。证明USP / NF分析方法适用于该药品或原料药的信息应包括在提交的验证协议里。

验证方法应该包括，但不限于：药典方法中以预定的验收标准进行验证，并且该方法的详细信息（例如，多个试剂的适用性，设备，组件，色谱条件，色谱柱，检测器类型，检测器信号响应，系统适应性，样品制备和稳定性）。验证方法应包括验证范围和规定了验证特性的测试（例如，特异性，检测限，定量限，精密度，准确度等）。因为药物在不同的合成路线均有严格的设置，药品制造过程中分析方法有色谱条件改变的情况。如果按照法无偏差，稳定性研究不需要被药典收录。

VII. 统计分析和模型

A.统计

预定的验收标准验证特征可用验证数据的统计分析进行评估。在数据分析中使用的所有的统计方法和参数应根据合理的原则和恰当的预期评估。线性回归分析R（相关系数）呈报的统计数据中应该提供R平方（决定系数），最小二乘法，方差分析，置信区间等。有关对比用的统计技术的信息，以及有关分析数据，相关文献或文本的解释应进行讨论。

B.模型

一些分析方法可能使用化学计量学和/或多元模式。在开发这些模型时，应该包括在统计上足够数量的模型开发样本和可比样本进行模型范围的验证。合适的软件应被用于数据分析。模型的参数应该随之改变来测试模型的稳定性。

VIII. 分析程序生命周期管理

一旦分析过程（包括药典方法）被成功地验证和实施，该过程将在产品的整个生命周期遵循。方法的性能趋势分析应定期进行，以评估是否需要进行优化分析程序或对分析过程的整体或部分进行重新验证。如果某一分析方法在分析方法中规定的使用条件下反复调整，才能满足建立了系统适用性的要求，则该分析方法应重新评估、验证或修订。

在一个产品的生命周期，新的信息（例如，更好地了解产品或新杂质）可保证一个新的或其他分析方法的开发和验证。保证产品质量时，新的技术应给与更多的鼓励和信心。申请人应定期评估对产品的分析方法是否恰当，并考虑新的或替代方法。

在分析生命周期的变化时，应当对样品进行适当数量的存档，以便进行比较研究。留样数量应根据科学原理和风险评估确定。对于那些生产过程中敏感且易产生复杂变化的产品，留样样品是作对比的重要工具。在比较研究中使用的留样样品应包括具有代表性的临床试验材料样品和销售产品。

如果一个基于风险的评估或其他程序带来的新的方法或者程序在变化的分析过程中被转移到一个新的测试网站或更换；应考虑再验证，一个新的验证工作，分析方法比较研究，或两者的组合。在某些情况下，改变药物物质或药物产品的生产过程中也可能有必要对分析程序进行重新验证。这些另外的研究将在下面讨论。

A.重新验证

在验证部分（第六部分）中描述的原则适用于重新验证。当分析方法发生变化（例如，在配方或制造过程中设备或试剂或的改变），应考虑所有的分析程序的全部或部分的再验证。在药物制造过程中制造工艺的变化，或引入新的药物产品制剂，可能会影响方法的性能的改变（例如，合成路线，发酵）。分析方法应进行重新验证。

重新验证可以确保该分析方法保持其重要的性能特性（例如，专属性，精确度，准确度，等等），且重新验证的程度取决于变化的性质。

B.分析方法的可比性研究

当你提交一个FDA批准的分析方法与一个可替代的分析方法，或者当一个分析方法从一个实验室转移到另一个实验室的时候，通常需要进行分析方法比较研究。这些方案在下文讨论。

1．可供选择的分析方法

另一种分析方法是用于取代FDA批准的分析程序的分析方法。对于NDA或ANDA，您应该在申请时提交所有的被推荐的可替代的分析程序及对程序的描述。

对于NDA或ANDA申请批准后的程序，或者对于BLA批准的程序，但是不包含FDA的规则，可选择分析程序的补充，修订、或删除必须在记录下一个年度报告中，而该可选择程序与批准申请中提交的分析程序相比可以对检测物质提供相同的甚至于更高的质量（鉴别、强度、质量、纯度、和效力）保证。在BLAs中，补充或者修订的程序需要作为补充文件提交。FDA建议用适当的评审组讨论，以确定相应的报告类别。

对于生物制品，很少有分析方法可以被收录进FDA法规。发生这种情况时，替代分析程序按照21 CFR610.9（a）提交。该文件指出申请人应该提出证据“.证明该修改将保证生物产品的安全性，纯度，效力和有效性等于或优于该生物制品的一般标准或补充标准中的方法或程序可以提供的保证。程序的修订需要经过申请评审过程或者批准后补充后由FDA批准。你应该明确可选择分析程序的用法（例如：释放、稳定性测试），并为它的内容、验证数据、与FDA批准的分析程序的比较数据提供一个认可理由。另外需要做一个比较研究来证明至少达到以下效果：

&#8226;该新方法加上任何额外的控制措施对于等于或优于原始方法。  

&#8226;新的分析方法与原始程序相比更不容易产生基质效应。

如果新的程序中发现了新的方法或产品的相关的变体或任何新的杂质，则需要检测历史归档批次的样品，以证明变体或杂质的检出是由于新方法的敏感性和选择性增加的缘故而不是因为改变处理产生的杂质。如果该过程具有稳定指示属性：

&#8226;适当的样品具有比较新方法和原始方法检测有关物质和降解产物的能力。  

&#8226;进行比较的分析批次的数量应该具有统计学相关性和合理的预先建立的置信区间。  

&#8226;等效，非劣效性或优越性的研究应该用适当的统计方法进行，以表明新的或修订的方法性能与原来的方法相当或比原来的方法更好。

&#8226;进行比较的产品测试的统计分析应加以鉴别。  

&#8226;比较结果的偏置应该进行讨论并附带适当的说明。

2．分析方法转移的研究

分析方法转移通常是在一个内部传输协议下进行，内部传输协议列出详细的参数用于检验将应用到结果的预定验收标准。转移研究通常涉及两个或多个实验室或实验点（原始实验室和接收实验室）执行预先批准转移协议。始发和接收实验室需要使用大量的有代表性的物质（例如，同一批次的原料药或制剂产品）。

比较研究评估准确度和精密度，尤其是涉及到评估实验室间的变异性。转移分析过程也是一个稳定指示方法，强制降解样品或含相关产品相关的杂质的样品应在两个站点进行分析。 USP通则<1224> 《分析程序转移》为该主题提供了相关指导。

C. NDA，ANDA，BLA批准上市后变更报告

上市后改变分析程序需报告FDA  并符合21 CFR314.70和21 CFR601.12. FDA行业指南《已批准NDA或ANDA的变更》和《已批准NDA或ANDA的变更；规格  - 使用执法自由裁量权的药典变化》针对NDA或ANDA不同种类的上市后变更的相应报告类别提供了附加信息。由CDER和CBER监管的BLAs上市后变更的相似信息来源于FDA指南《特定生物技术及制定合成生物制品的已批准申请的变更》。

IX．FDA的方法验证

部分NDA或ANDA的审批流程，包括FDA实验室评估，以确定该分析方法是否适用于质量控制和监管目的。如果进行实验室评估，FDA实验室需要你根据FDA实验室提供的清单提供详细的样品和相应的试剂。这些可能包括产品样本，标准品，关键试剂，材料安全数据表和耗材。实验室结果和意见将在FDA实验室被转发到产品的质量评审员。

对于某些生物制品， 许可申请的产品中代表性样品及使用同批次产品进行测试的结果总结应与生物许可申请同时提交。 FDA实验室将验证的方法的性能和您提交的结果。在生物许可申请预审会或者提交生物许可后，FDA实验室会需要你提供标准品、对照、试剂、材料安全数据表和耗材。

转自 李永康博客

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