网友提问：戴安强酸性阳离子色谱柱用什么溶剂冲洗和保存？

大呆子

戴安强酸性阳离子色谱柱用什么溶剂冲洗和保存啊

毒手药王邓智先

色谱柱使用久了，会出现分离度降低，理论塔板数降低等柱效降低的现象，适当处理能使柱效恢复。但不是所有柱子 都能倒冲的，最好问问生产商。不了解的话，还是按下面的方法处理一下试试。
常规处理:硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱每一次用完后用低流速长时间的二氯甲烷或正己烷等溶剂冲洗;键合相硅胶色谱柱、离子交换色谱柱和凝胶色谱柱先用蒸馏水冲洗,再用甲醇冲洗,然后用甲醇与蒸馏水以一定比例混合的溶液冲洗后过夜。
对于已使用一段时间后柱效下降的色谱柱可按以下方法进行再生。再生处理包括活化(右→左)和净化(左→右)两种。硅胶、氧化铝、极性键合相色谱柱按下列顺序冲洗:三甲基戊烷或己烷←→三氯乙烷←→乙酸乙脂←→丙酮←→乙醇←→水。键合相硅胶柱:蒸馏水←→甲醇(冲洗过程中可加入少量二甲基甲酰胺)。离子交换树脂柱:高浓度的NaCl溶液(1-2molL的NaCl溶液)可使大部分树脂再生,油脂等少数与树脂紧密结合的物质可用低浓度碱溶液(如0.1molL的NaOH溶液)冲洗,酸性有机物吸附在固定相的用低pH缓冲液冲洗,碱性有机物用高pH缓冲液冲洗,然后再用蒸馏水←→甲醇←→二氯甲烷←→甲醇←→蒸馏水冲洗。凝胶色谱柱:由于凝胶色谱柱是根据被分离物质的分子量大小而分离物质,通常用稀的氢氧化钠或非离子型去垢剂(0.2%-1%NP-40或Lubrol)冲洗可除去大部分的结合物质,如果一些污染物仍然不能清除时,用24%或30%乙腈冲洗过夜可除去疏水蛋白,用30%-50%乙酸可除去亲水蛋白,用蛋白水解酶处理可分解凝胶中剩余的痕量胃蛋白酶,然后再用蒸馏水←→甲醇←→蒸馏水冲洗。
已污染的色谱柱的处理:因保留强的物质污染,流动相或样品中不溶物沉积于柱头,可用下列方法洗涤:去除脂类可用四氢呋喃、乙腈或甲醇洗涤;去除蛋白质可用乙腈、丙醇和1%三氯乙酸进行梯度洗脱;一些高疏水性化合物可用乙腈或甲醇洗脱,同时反复注入100-200ml的四氢呋喃。
柱头处理:对于柱头堵塞污染严重的情况而且用溶剂冲洗无效的色谱柱,只有打开柱子去除柱顶的填料重装:先拆下不锈钢烧结过滤器,检查柱床,常见凹陷或受污染的带色填料,剔去不规则床层和带色填料,使柱床显白色并完全水平,再用甲醇作糊状填料匀浆液,将糊状填料匀浆液滴在柱上靠重力从匀浆液中排出甲醇液,重复直到填料水平。

柱子的贮存:首先柱子必须清洗干净后才能贮存,柱子不能贮存在水或水性溶剂中,否则会引起微生物的滋生。极性色谱柱可用适当溶剂如二氯甲烷冲洗;键合相色谱柱用甲醇冲洗;阴离子交换色谱柱用0.002%洗必泰(双氯苯双胍己烷)的缓冲液冲洗,阳离子交换色谱柱用0.005%硫柳汞缓冲液冲洗;凝胶色谱柱用缓冲液中加0.02%叠氮化钠或用20%乙醇冲洗。再将柱子两头密封,以防止溶剂蒸发使柱子干燥而引起柱子结构的几何学改变。

毒手药王邓智先

按看说明书或咨询色谱柱厂商，防止损害色谱柱，离子柱都不便宜，小心为上。
用纯水短时间内冲洗色谱柱，通常不会对色谱柱造成较大的损伤，但如果长时间用水冲洗色谱柱则
可能引起固定相流失和相塌陷现象，所以若非必要请尽量避免用纯水冲洗色谱柱，建议在水中加入一定
量的甲醇或乙腈进行冲洗，通常水的含量<90%不会对色谱柱造成任何影响。
原因分析：
        首先，由于目前所用的色谱柱大多以硅胶为基质，硅胶的溶解特点是在纯水中的溶解度比在含有一
定浓度有机溶剂的流动相中要大得多，所以长时间的用纯水冲洗会导致固定相的流失，引起柱效下降。
        其次，对于常规的 C18 柱而言，由于C18 长链与水是不互溶的，C18 长链之间的相互作用力大于
C18 与水分子的作用力，长时间的用水冲洗，使得C18 长链之间相互靠近，水流的冲刷，导致相互联结
的C18 长链倒伏在硅胶基质的表面，对疏水性物质的保留能力下降，即相塌陷。针对用纯水冲洗容易出
现相塌陷的现象，有些厂家推出了纯水柱（如我公司的UltimateTM AQ-C18 柱），这种纯水柱可以用纯
水作流动相而不会产生相塌陷，这对只溶于纯水的样品的分析提供了一个很好的选择。
      第三，如使用过含缓冲盐的流动相的色谱柱，用纯水冲洗，并一定能将缓冲盐完全洗去。因为，由
于缓冲盐难溶于有机溶剂，C18 反相柱中用的填料是在硅胶表面上接上许许多多的C18 长链，相当于一
个疏水的有机相，而硅胶基体被有机物质包裹着，所以用纯缓冲盐水溶液做流动相时也许缓冲盐不容易
到达硅胶基质，不至损害基体。但所用的流动相通常会含一部分有机溶剂，而且这些有机溶剂与C18
长链是互溶的，因此有机溶剂的加入增强了流动相渗入硅胶基质的能力，能使部分缓冲盐达到硅胶基质。
同样的道理，用纯水冲洗只能洗掉表面的缓冲盐，而渗入深处的缓冲盐则仍然残留在那里。所以最好在
水中加入部分有机溶剂进行冲洗，一般的C18 柱通常用含水20％～90％都可以，含水的比例要视分析
时使用的流动相来定，原则上，用于冲洗的流动相中水的比例应该等于或高于（缓冲盐用后清洗的情况，
推荐使用“等于”）分析时所用流动相中水的比例。

毒手药王邓智先

色谱柱的再生
高效液相色谱柱是消耗品,会随使用时间或进样的次数增加,出现色谱峰高降低,峰宽加大或出现肩峰,柱效下降.需要定期进行彻底清洗和再生，不同的色谱柱清洗方法各不相同：
1.反相柱
分别用甲醇:水=90:10,纯甲醇（HPLC级）,异丙醇（HPLC级）,二氯甲烷（HPLC级）等溶剂作为流动相,依次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于20倍的色谱柱体积.然后再以相反的次序冲洗.
2.正相柱
分别用正己烷（HPLC级）,异丙醇（HPLC级）,二氯甲烷（HPLC级）,甲醇（HPLC级）等溶剂做流动相,顺次冲洗,每种流动相流经色谱柱不少于 20倍的柱体积(异丙醇粘度大,可降低流速,避免压力过高).注意使用溶剂的次序不要颠倒,用甲醇冲洗完后,再以相反的次序冲洗至正己烷.所有的流动相必须严格脱水.
3.离子交换柱
长时间在缓冲溶液中使用和进样,将导致色谱柱离子交换能力下降,.用稀酸缓冲溶液冲洗可以使阳离子柱再生,反之,用稀碱缓冲溶液冲洗可以使阴离子柱再生.
另外,还可以选择能溶解柱内污染物的溶剂为流动相做正方向和反方向冲洗.但再生后的色谱柱柱效是不可能恢复到新柱的水平的.
如果柱子装反了,可以调回来,但可能会造成柱内担体塌陷.在不得已的情况下尽量不要反装色谱柱.



色谱柱使用前注意事项：色谱柱的储存液无特殊说明，均为评价报告所示的流动相。在使用前，一定要注意色谱柱的储存液与要分析样品的流动相是否互溶。在反相色谱中，如用高浓度的盐或缓冲液作洗脱剂，应先用10％左右的低浓度的有机相洗脱剂过渡一下，否则缓冲液中的盐在高浓度的有机相中很容易析出，堵塞色谱柱。
流动相的注意：流动相中所使用的各种有机溶剂要尽可能使用色谱纯，配流动相的水最好是超纯水或全玻璃器皿的双蒸水。如果将所配得流动相再经过0.45μm的滤膜过滤一次则更好，尤其是含盐的流动相。另外，装流动相的容器和色谱系统中的在线过滤器等装置应该定期清洗或更换。
以常规硅胶为基质的键合相填料通常的PH值适用范围是2.0-8.0，BDS C18适合于碱性化合物，PH值适用范围为2.0-10.0。当必须要在PH值适用范围的边界条件下使用色谱柱时，每次使用结束后立即用适合于色谱柱储存并与所使用的流动相互溶的溶剂清洗，并完全置换掉原来所使用的流动相。
样品的要求：样品也要尽可能清洁，可选用样品过滤器或样品预处理柱（SPE）对样品进行预处理；若样品不便处理，要使用保护柱。在用正相色谱法分析样品时，所有的溶剂和样品应严格脱水。
色谱柱的保存
（1）反相色谱柱每天实验后的保养：使用缓冲液或含盐的流动相，实验完成后应用10%的甲醇/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用甲醇冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的甲醇，防止将填料冲塌陷。
（2）长期保存色谱柱：如色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下。对于反相柱可以储存于纯甲醇或乙腈中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正己烷中，离子交换柱可以储存于水（含防腐剂叠氮化钠或柳硫汞）中，并将购买新色谱柱时附送的堵头堵上。储存的温度最好是室温。

色谱柱出现问题的解决办法
色谱柱在使用中最常见的问题就是柱压升高，如果柱压是在长时间使用过程中缓慢增加，属于正常现象。但柱压在使用过程中突然升高（系统管路堵塞及压力传感器故障除外），以下列举了部分常见原因及解决办法：
1.色谱柱头的过滤筛板堵塞或污染；
解决方法：如确定是色谱柱头的过滤筛板被污染，可以将色谱柱反方向用甲醇冲洗至正常压力，或者卸下色谱柱头，将其放在10％的稀硝酸内超声清洗10分钟，后再用纯水超声10分钟，重新装入色谱柱。
2.色谱柱头的填料被样品污染；
解决方法：如确定色谱柱头的填料被污染，将柱头螺丝卸下，挖出柱内前段被污染的填料，用相同的柱填料重新填入，仔细修复后，重新安装上柱头螺丝。
3.色谱柱内缓冲液中的盐遇到高浓度的甲醇或其他有机溶剂，形成结晶析出； 解决方法：如确定定是盐结晶，用10%的甲醇/水冲洗色谱柱使柱内盐全部溶解，再换高浓度甲醇。
4.流动相PH值过大或过小使固定相结构破坏或溶解。解决方法：如果因pH值使用不当，很难恢复。

毒手药王邓智先

色谱柱的清洗和再生方法

除非特殊说明，在所有情况下，所用溶剂的体积应该是色谱柱体积的40-60倍。
应在清洗过程开始和结束时各测一次柱效和容量因子等，比较色谱柱性能的改善，以确定清洗的效果。
确保色谱柱中没有样品和缓冲溶液，清洗前所用的溶剂应与最初清洗时所用的溶剂相溶。
应确保实验测试时所用的流动相与色谱柱中最后的溶剂相溶。

1正相填料
用四氢呋喃冲洗。
用甲醇冲洗。
用四氢呋喃冲洗。
二氯甲烷冲洗。
用无苯正己烷冲洗。

2反相填料
用HPLC级水冲洗，冲洗时进4等份的200μl的二甲亚砜（DMSO）。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。
用甲醇冲洗。

3阴离子交换填料
用HPLC级水冲洗。
用甲醇冲洗。
用氯仿冲洗。

4阳离子交换填料
用HPLC级水冲洗；在冲洗的过程中进4等份200μl的DMSO
四氢呋喃冲洗。

5蛋白质凝胶过滤填料
去除蛋白质尺寸排阻介质中的污染物有两种清洗/再生的方法。
弱保留蛋白质
用30moL/L pH3.0磷酸盐缓冲液冲洗。
强保留蛋白质
用100%的水到100%的乙腈梯度洗脱60min。

hongwei2000

严格按厂家说明书操作
这种东西好贵的
而且好像对有机溶剂非常敏感
万一当成C18来处理麻烦可大了