人云亦云易，探索求真难（培养基灌装的培养温度到底是多少？）

ensign75

在2004年的FDA Industry Guidance “Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing — Current Good Manufacturing Practice”中就有这样要先低温后高温的规定“Incubation time should not be less than 14 days. If two temperatures are used for the incubation of the media filled units, the units should be incubated for at least 7 days at each temperature (starting with the lower temperature).

我个人认为这个才是无菌工艺制药的最重要的一部指南，对于无菌工艺，建议先看这个。

青城/怒云

红茶. 发表于 2015-3-11 08:47
如果专家后面这句话成立的话，那日常用两种培养基两种培养温度，也陷进去了啵，难不成每种培养基33和25做 ...

但无菌检查是将两种菌分开培养滴，药典的方法专家是不敢质疑滴；
培养基灌装两种温度培养我基本是认可的，对于两个温度同时培养还是分开培养，我目前的看法是认为分开的好；
当然最好的折腾药厂的做法，是两种温度同时培养，然后再分别交换温度继续培养。

青城/怒云

红茶. 发表于 2015-3-11 08:47
如果专家后面这句话成立的话，那日常用两种培养基两种培养温度，也陷进去了啵，难不成每种培养基33和25做 ...

无菌检查是将两种菌分开培养滴，药典的方法专家是不敢质疑滴；
培养基灌装两种温度培养我基本是认可的，对于两个温度同时培养还是分开培养，我目前的看法是认为分开的好；
当然最好的折腾药厂的做法，是两种温度同时培养，然后再分别交换温度继续培养。

风雨之神-zu

谢谢分享，原来一直只是经验的传承，今天终于知道了出处。非常支持这种探索求真的品质。

xmaysy

这些资料说的都没错，但都特别强调有促生长实验的支持。为什么各国药典都要求，霉菌培养在20~25度，细菌培养在30~35度。有哪家微生物实验室有数据证明，在20~35某一温度点，细菌和霉菌生长情况与2个温度分别培养的生长情况相同或相似？

xmaysy

选哪个温度不是验证人员说了算，而是由微生物专家，拿着数据说话。

红茶.

青城/怒云 发表于 2015-3-11 08:52
无菌检查是将两种菌分开培养滴，药典的方法专家是不敢质疑滴；
培养基灌装两种温度培养我基本是认可的， ...

质疑的事情他敢想也不敢说
我目前也是25和33分两拨到14天，不太想得通这样个做法比一拨两个温度培养，不好在什么地方。

青城/怒云

红茶. 发表于 2015-3-11 09:18
质疑的事情他敢想也不敢说
我目前也是25和33分两拨到14天，不太想得通这样个做法比一拨两个温度培养 ...

你可以在各自培养7天后，再转移到另一温度继续7天，
神仙也不会说什么滴

石头968

唉，知其然不知其所以然，到底为什么呢？

叶非

ensign75 发表于 2015-3-11 08:49
在2004年的FDA Industry Guidance “Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing — Current Go ...

首先，从FDA的这句话来说，FDA并没有说一定需要两个温度条件培养，只是说如果采用两个条件的话，每种条件都至少需要7天，而且培养是从低温开始。这个可以证明培养如果采用两个温度条件需要从低温开始的法规依据，但是并不能否认选择一个温度培养条件也是合适的。

道路漫长黑暗

之前没有注意这个问题，如果吧叶版跟大家的讨论汇总下可以出一个关于XXX问题的考证了。

叶非

ensign75 发表于 2015-3-11 08:49
在2004年的FDA Industry Guidance “Sterile Drug Products Produced by Aseptic Processing — Current Go ...

另外，目前，一些理念也在变化，这点从制药工艺的验证的相关描述变化也可以看出，《制药工艺的验证》第二版的相关章节中的描述是这样的：
6.        培养条件
  培养的温度和时间在不同的方法上有变化。最近PDA的调查结果表明：尽管培养基灌装的培养时间大部分固定在14天，时间周期使两种不同温度下的培养成为需要，20-25℃的培养用于探测霉菌和酵母菌，30-35℃的培养用于探测细菌。如果培养基是用于探测霉菌和酵母菌，需要在更适于它们繁殖的温度下培养。采用多种温度的问题是容器在两种温度下如何分配。一些公司选择先在一种温度下培养然后再在另一种温度下培养（调查结果表明似乎没有优先选择哪种温度）[25].
      Other firms split the batch into two halves, each of which is then incubated at a single temperature. In choosing this approach the number of units to be incubated at each temperature should exceed 3000 to be meaningful statistically. A second consideration is how the batch is to be split. Given the concerns expressed earlier about the potential for contamination during the setup of the operation, dividing the batch in half on a time basis is inappropriate. It would seem preferable to alternate containers between the two temperatures so that the detection of a contaminant that requires a specific temperature for growth would be possible for even the first units filled. If boxes or totes are used to collect containers after
filling, the odd-numbered boxes could be incubated at one temperature while the even-numbered boxes are incubated at the other.
     另一些公司将批平均分成两部分，每一部分在一种温度下培养。选择这种方法时，要使结果有统计意义，在每种温度下培养的容器必须超过3000。第二种考虑是如何分批。考虑到前述的在操作设置时存在潜在污染的关注点，以时间为基础将批平均分成两部分是不恰当的。似乎在两种温度下轮流培养容器似乎更可取，所以即使是探测第一批容器中要求特定温度下才能繁殖的污染也是可能的。如果在灌装后使用盒子或包收集污染，那么奇数序号的盒子可以在一种温度下培养，而偶数序号的盒子在另一种温度下培养。
      In the industry today, the most common incubation period for media fills is 14 days.Many firms will inspect the filled containers (in a nondestructive manner) at fewer than 14 days (usually at 7 days) and make a preliminary determination on whether they can start production on a risk basis. The fill would be reinspected at 14 days to establish the firms performance officially. Any material filled before the 14-day inspection may be at risk pending the ultimate outcome of the media-fill test. Some firms have chosen to incubate their media fills longer, typically 21 days. This longer period is chosen to allow the outgrowth of slow-growing or damaged organisms. Longer incubation periods may also be used when the incubation temperature is shifted. For example, the containers may be held at 20-25℃ for 7 days, followed by 14 days at 30-35℃.
     当今的制药业中，培养基灌装最常用的培养期是14天。许多公司在少于14天（通常为7天）时就检查灌装容器，并初步决定是否冒险开始生产。在14天时再次检查灌装容器，以确定公司的决定是否正确。在14天检查前的原料灌装都将冒着培养基灌装测试最后结果尚未确定的风险。一些公司选择较长时间的培养期，一般为21天。选择较长的培养期会出现繁殖较慢或损坏的微生物的生长晕。当培养温度改变时也可以选择较长的培养期。例如，容器在20-25℃下培养7天，然后再在30-35℃下培养14天。
这点和第三版的内容，有了较大的不同！

lumang

日本无菌药品指南：
3.        培养液应该在事先确定的温度下（最好在20～35℃之间）培养至少14天。如果测试温度不在这个范围内，那么应该对温度进行调整，使之在事先确定温度的±2.5℃之内。
4.        如果测试期间使用两个不同的温度，那么培养液应该在较低温度下培养至少7天，然后再在较高的温度下培养相同长的时间。

红茶.

青城/怒云 发表于 2015-3-11 09:49
你可以在各自培养7天后，再转移到另一温度继续7天，
神仙也不会说什么滴

我闲得慌咩，折腾。

yuansoul

青城/怒云 发表于 2015-3-11 08:52
但无菌检查是将两种菌分开培养滴，药典的方法专家是不敢质疑滴；
培养基灌装两种温度培养我基本是认可的 ...

我感觉麻烦出就出在这里。培养基模拟分装过程，抓住菌的概率本身就小。那么分开养就存在可能杀死了细菌，或真菌。而无菌检查相当于平行，所以分开来说假阴性概率是可以接受的。估计，老外对此也是很纠结。

青城/怒云

yuansoul 发表于 2015-3-11 11:33
我感觉麻烦出就出在这里。培养基模拟分装过程，抓住菌的概率本身就小。那么分开养就存在可能杀死了细菌， ...

最好的方法是两个培养室
分别培养7天
然后换窝
再采用另一种温度继续培养7天
折腾吧
反正经受住折腾的都是专家认可滴

沁人绿茶.

一个温度采用倒置另一个温度采用正放的依据泥

叶非

lumang 发表于 2015-3-11 10:08
日本无菌药品指南：
3.        培养液应该在事先确定的温度下（最好在20～35℃之间）培养至少14天。如果测试温度不 ...

我觉得这段话翻译有问题，但是总体感觉和FDA的指南上的要求是类似的！

叶非

青城/怒云 发表于 2015-3-11 08:52
但无菌检查是将两种菌分开培养滴，药典的方法专家是不敢质疑滴；
培养基灌装两种温度培养我基本是认可的 ...

首先，我并不否认两种培养温度的做法，因为很多企业都是这么做的。而且我所在的公司，也一直都是这么做的。但是，这么做，是不是唯一的正确答案，现在看来，是值得商榷的。
其次，一种培养温度，就目前的资料来看，并没有说不可以，至少在法规或者技术层面，是被接受的，当然，前提条件是促生长实验的结果。
再次，很多朋友引用的是药典里的无菌检查是要求在两个温度下进行，但是这里面有个问题，就是培养基灌装是使用一种培养基，而无菌检查时，是不同的培养基在不同的温度下进行，而非一种培养基在不同的温度下培养。究其核心，还是因为不同的菌在不同的培养基中，其最适合的温度不同。如果基于这点，那么我使用一种培养基，证明了无论霉菌还是细菌，在某一温度下的培养基中都有良好的生长性，为什么不可以呢？

叶非

青城/怒云 发表于 2015-3-11 11:40
最好的方法是两个培养室
分别培养7天
然后换窝

《制药工艺验证》第二版中，就提到了这种做法！