在蛋白浓缩过程中蛋白透过

轻舞飞扬-spring · 发表于 2015-12-7 12:44:52

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millipore的用改良纤维素模，30KD，0.57m2，在浓缩过程中几乎全部透过（蛋白分子大于膜孔径的），蛋白去测SEC也没问题，清洗完膜，测完整性也是合格的，求帮助！！！

qhm123 · 发表于 2015-12-7 13:48:01

尾水检测乳状浑浊？

snail_zhli · 发表于 2015-12-7 14:10:10

蛋白分子大小是多少？

轻舞飞扬-spring · 发表于 2015-12-7 16:17:59

snail_zhli 发表于 2015-12-7 14:10
蛋白分子大小是多少？

70多Kd,不到80

轻舞飞扬-spring · 发表于 2015-12-7 16:23:50

qhm123 发表于 2015-12-7 13:48
尾水检测乳状浑浊？

您是说透过液？我们测了透过液的OD吸光值很高，所以就没再继续做，最后测了SEC看图谱也没有降解的迹象！！！您说的乳状浑浊是检测那个指标，求详细说明，刚做，不是很懂！！！谢谢！！！

snail_zhli · 发表于 2015-12-7 16:31:38

轻舞飞扬-spring 发表于 2015-12-7 16:17
70多Kd,不到80

一般建议是三分之一到六分之一，你可以考虑用10KD的试试。当然你也要考虑蛋白没有裂解的可能，或在浓缩过程已经发生裂解或变性等。

轻舞飞扬-spring · 发表于 2015-12-7 18:33:19

snail_zhli 发表于 2015-12-7 16:31
一般建议是三分之一到六分之一，你可以考虑用10KD的试试。当然你也要考虑蛋白没有裂解的可能，或在浓缩过 ...

这次浓缩的浓度较高，考虑到10Kd的跨膜压会很大、很危险，降解，变性的风险太高了！！有没有可能是膜孔径变化了？因为使用前都要0.5M NaOH CIP 45-60min。

snail_zhli · 发表于 2015-12-8 08:26:02

轻舞飞扬-spring 发表于 2015-12-7 18:33
这次浓缩的浓度较高，考虑到10Kd的跨膜压会很大、很危险，降解，变性的风险太高了！！有没有可能是膜孔径 ...

你说的情况也有可能！但你对膜的完整性测试还是能证明膜孔经未发生根本变化。你使用的膜对0.5M氢氧化钠的耐受性是可以从厂家提供的技术资料中找到的。如果不耐受建议更换其他清洗消毒剂。除了膜本身，我感觉是你的样品在超滤浓缩或透析过程发生了变化的可能性会大些。是不是目标蛋白不耐受剪切力发生了变化，或是浓缩过程蛋白聚合发现变性，或透析过程PH,温度，离子强度变化引起的蛋白变化等等都应考虑。

轻舞飞扬-spring · 发表于 2015-12-8 16:38:30

snail_zhli 发表于 2015-12-8 08:26
你说的情况也有可能！但你对膜的完整性测试还是能证明膜孔经未发生根本变化。你使用的膜对0.5M氢氧化钠的 ...

您说的这些情况也很有可能，后续的我们再研究研究，谢谢您！！！

snail_zhli · 发表于 2015-12-8 17:53:41

不要客气，大家交流学习。希望有了调查结果后能给我们大家分享一下，也让我们可以借鉴你们的经验！

轻舞飞扬-spring · 发表于 2015-12-8 19:28:36

snail_zhli 发表于 2015-12-8 17:53
不要客气，大家交流学习。希望有了调查结果后能给我们大家分享一下，也让我们可以借鉴你们的经验！

好的，没问题，一有结果，我会马上分享给大家的，大家互相学习

轻舞飞扬-spring · 发表于 2016-1-14 14:35:55

snail_zhli 发表于 2015-12-8 17:53
不要客气，大家交流学习。希望有了调查结果后能给我们大家分享一下，也让我们可以借鉴你们的经验！

您好，蒲友：
关于上次我们的蛋白超滤浓缩透过问题，现在我们基本找出问题所在了！是膜包的问题！！！应该是膜包内部结构发生变化了（这个和Millipore技术支持初步沟通他们认为可能是膜包保存不当，我们也是按照膜包保存方法保存的，我们分析觉得是膜稳定性不够好，），具体是孔径还是其它材质的问题，现在还没有得到Millipore的回应），我们重新订购了一块相同的膜，然后超滤浓缩就没啥问题！！！

yeni · 发表于 2016-1-14 16:19:12

请问你的膜用过几次了呢，我们开始用30k的，发现透过一半，改为10k，后来10k用过几次后发现透过比最初透过增多，这次又换的新的膜包

轻舞飞扬-spring · 发表于 2016-1-14 16:30:00

yeni 发表于 2016-1-14 16:19
请问你的膜用过几次了呢，我们开始用30k的，发现透过一半，改为10k，后来10k用过几次后发现透过比最初透过 ...

总共用过三次，第四次用就透过了！！！前三次是连着用的，第四次用是6个月后，期间一直保存在0.01M NaOH中的！你这么说可能真就是膜本身的质量问题了！！！你们的保存液是什么？多久换一次保存液？你们CIP条件是咋样的？那你们有没有问过膜厂家销售或者技术支持？

snail_zhli · 发表于 2016-1-14 16:51:32

轻舞飞扬-spring 发表于 2016-1-14 14:35
您好，蒲友：
关于上次我们的蛋白超滤浓缩透过问题，现在我们基本找出问题所在了！是膜包的问题！！！应 ...

谢谢你的分享，也恭喜你找到问题的所在，祝工作顺利！

yeni · 发表于 2016-1-14 16:55:53

轻舞飞扬-spring 发表于 2016-1-14 16:30
总共用过三次，第四次用就透过了！！！前三次是连着用的，第四次用是6个月后，期间一直保存在0.01M NaOH ...

0.1MNaOH保存和CIP.有时候室温变化引起膜热胀冷缩是技术支持给的分析，压力的控制也是有影响的

轻舞飞扬-spring · 发表于 2016-1-14 17:07:26

yeni 发表于 2016-1-14 16:55
0.1MNaOH保存和CIP.有时候室温变化引起膜热胀冷缩是技术支持给的分析，压力的控制也是有影响的

保存条件（0.1M有点高）但也符合膜说明书上范围要求！室温变化！！！！如果你们存放在车间的话他这个说法就有点勉强了（也反映出这型号膜稳定性很不好，使用条件比较苛刻！！！），至于压力，会有影响，不知道你们的操作压力多大了？

传神翻译 · 发表于 2016-1-14 17:11:16

0.1MNaOH保存和CIP.有时候室温变化引起膜热胀冷缩是技术支持给的分析，压力的控制也是有影响的
正解

传神翻译 · 发表于 2016-1-14 17:19:16

蛋白分子大小是多少？

yeni · 发表于 2016-1-14 20:18:26

轻舞飞扬-spring 发表于 2016-1-14 17:07
保存条件（0.1M有点高）但也符合膜说明书上范围要求！室温变化！！！！如果你们存放在车间的话他这个说法 ...

0.1Mpa.我们是试验室温度不是恒温的

[研发注册] 在蛋白浓缩过程中蛋白透过

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