细菌内毒素

钉子12

凝胶法细菌内毒素干扰实验中，A和B组，使用的稀释液也供试品溶液，请问加之前，供试品溶液需要再稀释吗？稀释多少倍？

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老鸟

干扰试验中，供试品溶液的浓度是和实验组中样品浓度一致就行。干扰试验的原理，在相同浓度下，看该浓度下的样品对内毒素试验的干扰。所以，条件要一致。

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老鸟

钉子12 发表于 2020-4-24 08:53
比如样本限值是2EU/ml，标准品为10EU/ml，鲎试剂灵敏度为0.25EU/ml，MVD=8倍。样品阳性组：B1（2入）10倍 ...

不对
首先，你的入应为鲎试剂的标示灵敏度，应为0.25EU/ml
干扰试验时在同样样品浓度下作的，你的MVD=8倍，那么你的干扰试验目的是来检测最大稀释倍数时，对内毒素试验的干扰的，所以你的试验应该如下设计：
1、将供试品稀释至最大稀释倍数；
2、用检查用水将内毒素制备成2入、1入、0.5入、0.25入溶液；
3、用稀释后供试品将内毒素制备成2入、1入、0.5入、0.25入供试品溶液
4、然后分别计算用检查用水稀释的内毒素的反应终点浓度的几何平均值（ES）和用供试品稀释的内毒素的反应终点浓度的几何平均值（ET）；计算公式网上查询，打字打不出来。
5、当ES和ET均在0.5入~2入内时，认为供试品在该浓度下不干扰试验。

老鸟

钉子12 发表于 2020-4-24 12:40
老师，我还有疑问
1.MVD是根据鲎试剂灵敏度来计算的，那怎么选择鲎试剂呢？是不是鲎试剂灵敏度的值越小越 ...

1、鲎试剂灵敏度满足要求就行，不是越灵敏越好，常用0.25EU/ml就能满足要求了，当该灵敏度下样品最大稀释倍数干扰试验不成立时，才考虑换更灵敏的鲎试剂；
2、鲎试剂的检测标准方法：0.1ml检查用水溶解鲎试剂，0.1ml样品，这样检测阴性后，就直接判断样品＜入，符合规定。所以，你不用考虑检测是鲎试剂的溶解所用检测用水及对样品稀释的影响。鲎试剂检测就是这样设计的。
3、针对你的第3个问题，麻烦亲仔细看我原来的描述“用稀释后供试品将内毒素制备成2入、1入、0.5入、0.25入供试品溶液”，用稀释后的供试品来稀释内毒素，就像用水一样，这样供试品的浓度会发生变化？

钉子12

老鸟 发表于 2020-04-23 07:22
干扰试验中，供试品溶液的浓度是和实验组中样品浓度一致就行。干扰试验的原理，在相同浓度下，看该浓度下的样品对内毒素试验的干扰。所以，条件要一致。

比如样本限值是2EU/ml，标准品为10EU/ml，鲎试剂灵敏度为0.25EU/ml，MVD=8倍。样品阳性组：B1（2入）10倍标准品加同体积2倍样本，B2（入）B1加同体积4倍样本，B3（0.5入）B2加同体积4倍样本，B4（0.25入）B3加同体积4倍样本，老师，这样加样对吗？

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老鸟

记得点认可哈

钉子12

老鸟 发表于 2020-04-24 09:37
不对
首先，你的入应为鲎试剂的标示灵敏度，应为0.25EU/ml
干扰试验时在同样样品浓度下作的，你的MVD=8倍，那么你的干扰试验目的是来检测最大稀释倍数时，对内毒素试验的干扰的，所以你的试验应该如下设计：
1、将供试品稀释至最大稀释倍数；
2、用检查用水将内毒素制备成2入、1入、0.5入、0.25入溶液；
3、用稀释后供试品将内毒素制备成2入、1入、0.5入、0.25入供试品溶液
4、然后分别计算用检查用水稀释的内毒素的反应终点浓度的几何平均值（ES）和用供试品稀释的内毒素的反应终点浓度的几何平均值（ET）；计算公式网上查询，打字打不出来。
5、当ES和ET均在0.5入~2入内时，认为供试品在该浓度下不干扰试验。

老师，我还有疑问
1.MVD是根据鲎试剂灵敏度来计算的，那怎么选择鲎试剂呢？是不是鲎试剂灵敏度的值越小越好？
2.最大稀释倍数是8倍，用最大稀释倍数的样本液稀释标准品，加入到0.1ml复溶的鲎试剂里，样本稀释倍数达到16倍了？
3.稀释标准品制备成2入，入，0.5入，0.25入的溶液时，稀释方法是逐级稀释，但是2入里含有8倍的样本溶液，由2入稀释到1入时，含有的样本溶液可能就不是8倍的了？
老师，我不知道我这样理解对不对，麻烦您给详细讲解一下供试品稀释内毒素的过程，谢谢！

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钉子12

老鸟 发表于 2020-04-24 13:09
1、鲎试剂灵敏度满足要求就行，不是越灵敏越好，常用0.25EU/ml就能满足要求了，当该灵敏度下样品最大稀释倍数干扰试验不成立时，才考虑换更灵敏的鲎试剂；
2、鲎试剂的检测标准方法：0.1ml检查用水溶解鲎试剂，0.1ml样品，这样检测阴性后，就直接判断样品＜入，符合规定。所以，你不用考虑检测是鲎试剂的溶解所用检测用水及对样品稀释的影响。鲎试剂检测就是这样设计的。
3、针对你的第3个问题，麻烦亲仔细看我原来的描述“用稀释后供试品将内毒素制备成2入、1入、0.5入、0.25入供试品溶液”，用稀释后的供试品来稀释内毒素，就像用水一样，这样供试品的浓度会发生变化？

谢谢老师的耐心指导

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好时光

老鸟 发表于 2020-4-24 09:37
记得点认可哈

溶液C平行双管也要计算ES吗