关于凝胶鲎试剂法测药品细胞内毒素的问题？

zjmillet

例如，A注射液的浓度为20mg/mL，限值要求小于1.2EU/mg，用灵敏度0.25EU/mL的鲎试剂做检测。计算出最大稀释倍数MVD=20*1.2/0.25=96。按照说明书操作：
阴性组：0.1mL鲎试剂 + 0.1mL无内毒素水
阳性组：0.1mL鲎试剂 + 0.1mL内毒素标准品（0.5EU/ml）
样品阳性组：0.1mL鲎试剂 + 0.05mL内毒素标准品（1EU/ml）+ 0.05mL样品（稀释48倍）
样品组：0.1mL鲎试剂 + 0.1mL样品（稀释96倍）
检测结果为，阴性无凝固，阳性凝固，样品阳性凝固，样品无凝固
问题：假设A注射液中真实含有内毒素为28.8EU/mL，稀释48倍后浓度为0.6EU/mL，稀释96倍后浓度为0.3EU/mL，按上述操作后各组的情况是：
阴性组含内毒素为0EU/mL
阳性组含内毒素为0.25EU/mL
样品阳性组含内毒素为0.25+0.15=0.4EU/mL
样品组含内毒素为0.15EU/mL
采用0.25EU/mL的鲎试剂，结果自然是与检测结果一致的。但A注射液中的内毒素为1.44EU/mg(28.8EUmL / 20mg/mL)超出了1.2EU/mg的限值。
为什么样品组要再稀释一倍（96*2倍）？这点我一直不能理解，请各位大大帮帮我，十分感谢！

明明是我

首先你要理解的是，样品组和样品阳性中样品浓度要保持一致，样品组是96倍稀释液，样品阳性48倍，但与等体积的内毒素标准溶液混合后，相当于再稀释了一倍，最终也是96倍稀释液。
另外，凝胶法是半定量法，无法做到定量。内毒素检测稀释倍数也不建议选到最大倍数。

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米斯特道格

要理解的是你的这个样品阳性对照组。
阳性对照组是为了确认样品本身对内毒素检测没有干扰所设计的。使用和你样品检测一样内毒素含量的样品加已知浓度的内毒素标准品。你这里样品+内毒素标准品就等于样品稀释了一倍。所以阳性对照组的样品稀释倍数也是96倍，和你样品本身是一样的。

微信5f09a95f

是这样吗，照你这个说法，内毒素已经定量测得啦呀？

yaya19900816

浓度相加？

歪说歪有李

明明是我 发表于 2020-09-15 22:54
首先你要理解的是，样品组和样品阳性中样品浓度要保持一致，样品组是96倍稀释液，样品阳性48倍，但与等体积的内毒素标准溶液混合后，相当于再稀释了一倍，最终也是96倍稀释液。
另外，凝胶法是半定量法，无法做到定量。内毒素检测稀释倍数也不建议选到最大倍数。

给自己留点后路，最大倍数不可取，同意。

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zjmillet

明明是我 发表于 2020-9-15 22:54
首先你要理解的是，样品组和样品阳性中样品浓度要保持一致，样品组是96倍稀释液，样品阳性48倍，但与等体积 ...

先谢谢你的回答。你说的我懂。可能是我的问题表述不清楚，你对我的问题理解有误。我没问样品组与样品阳性组，我问的是样品组为什么要再稀释一倍成192倍？这样的话内毒素的浓度可能就小于阳性组的浓度，这样检测还会准吗？谢谢

zjmillet

米斯特道格 发表于 2020-9-14 14:19
要理解的是你的这个样品阳性对照组。
阳性对照组是为了确认样品本身对内毒素检测没有干扰所设计的。使用和 ...

先谢谢你的回答。你说的我懂。可能是我的问题表述不清楚，你对我的问题理解有误。我没问样品组与样品阳性组，我问的是样品组为什么要再稀释一倍成192倍？这样的话内毒素的浓度可能就小于阳性组的浓度，这样检测还会准吗？谢谢

zjmillet

微信5f09a95f 发表于 2020-9-14 12:48
是这样吗，照你这个说法，内毒素已经定量测得啦呀？

我只是提出我的疑问，不懂就问而已，你要是知道，请正面解释回答

zjmillet

歪把子 发表于 2020-9-16 07:49
给自己留点后路，最大倍数不可取，同意。

我刚进单位，单位上的同事都用最大稀释倍数来做样品稀释，她们说，如果不用最大稀释倍数，得到的实验结果不准，我不明白为什么。您说最大倍数不可取，能举个例子说明为什么吗？谢谢

米斯特道格

zjmillet 发表于 2020-9-17 09:43
先谢谢你的回答。你说的我懂。可能是我的问题表述不清楚，你对我的问题理解有误。我没问样品组与样品阳性 ...

那就不纠结上面你描述的问题。如果你得到的最大有效稀释倍数是96.那么你样品再稀释成192倍就是错误的操作。你得不到一个符合你要求的结论。至于之前有老哥提到的不建议使用最大有效稀释倍数，如果你实验人员出现了一点稀释误差实际稀释了98倍，可能本来的阳性结果就变成了阴性结果了。风险上考虑比较大，除非你的样品干扰很大，必须最大稀释。

歪说歪有李

zjmillet 发表于 2020-09-17 09:57
我刚进单位，单位上的同事都用最大稀释倍数来做样品稀释，她们说，如果不用最大稀释倍数，得到的实验结果不准，我不明白为什么。您说最大倍数不可取，能举个例子说明为什么吗？谢谢

不用最大合格，用最大肯定合格，真正搞检验不给自己留余地？除非你的工艺不好，内毒素就是高

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方海、

提问：有谁知道美国生产CSE细菌内毒素工作标准品的厂家

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