提取外泌体，5中方法的作用

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目前外泌体仍是生物研究中的热点，提取外泌体的方法有多种，各有优缺点，选择合适的提取方法对下游实验极其重要。今天小逸为大家整理汇总了常见的几种提取方法，一起看看吧！

▲外泌体提取方法对比表

接下来，小逸逐个为大家介绍每个方法的优缺点！

1、超速离心法：外泌体分离的金标准1，但是由于这种方法尤其需要昂贵的大型仪器，且步骤繁多、非常耗时，因此还未开发出相关新式产品，且无法实现自动化；密度梯度离心法有着和差速离心法一样的问题，而且还需要额外的清洗步骤。

2、超滤法：提取外泌体过程中，外泌体会堵住滤孔，导致过滤提取效率的下降，且过滤产生的剪切力会导致外泌体的破裂，进一步降低外泌体提取效率，此外，对于血浆、血清等生物样本，由于其含杂质较多，因此很可能导致滤孔堵塞，从而限制了大体积样本在超滤法方面的应用2。

3、聚合物沉淀法：当前实验室最常用的外泌体提取方法3，但是这种方法提取的外泌体的纯度不高，沉淀中除了外泌体还会有很多包括脂蛋白在内的杂质，影响后续分析，且沉淀法涉及离心、重悬等操作，不利于自动化的进行，目前尚未有基于沉淀法的外必体提取自动化产品；

4、免疫亲和捕获法：主要局限在其较高的成本4，研发配套的经济可靠的仪器进行外泌体的捕获，需要较深的技术积累和较强整合能力；

5、微流体芯片技术：缺点主要体现在成本高、且由于微流控的定义就是基于微小流体的技术5，因此其对于大体积样本的处理能力很弱，一般仅适用于小体积样本的提取检测，部分新技术（外加电场和声波）对外泌体的影响尚有待检验。

     综上，传统的外泌体手动提取方法存在时间长、通量低、手动步骤多、工艺复杂、重复性低、无法满足临床试验要求的局限性。用于外泌体提取的金标准差速离心方法尤其是这样。例如，为了提取血浆中的外泌体，差速离心需要第一次离心去除细胞，第二次离心去除细胞碎片，第三次离心去除线粒体和其他细胞器，有时还需再用膜过滤去除较大的细胞外囊泡，然后是专业而昂贵的超速离心，70分钟以上才得到外泌体沉淀，最后经气泡重悬得到外泌体，整个过程最多可能需要一天的时间，并且涉及非常规离心机的多次离心、膜过滤、超速离心和重悬，整个过程中的任何操作问题都可能影响外泌体提取的效率和纯度，不同膜、不同离心机等外部条件的变化也会影响外泌体提取结果。作为液体活检领域的重要组成部分，如果使用传统的手动方法进行提取，每天只能处理少量样品，无法保证外泌体提取的效率和纯度。

   因此，自动化+高通量是外泌体提纯的技术发展趋势！

   自动化+高通量强强联合，已经在临床与科研应用中展现出高性价比优势，不仅能高效大量提取不同样本的外泌体，还可以对外泌体蛋白磷酸化进行检测，尤其适合外泌体规模化生产和蛋白质（磷酸化）组学研究！

xqliu

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迹小景

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呆呆戴

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