控制菌的检查

堂xgszuvzv

关于原辅料的控制菌大肠埃希菌的检查方法：

所用菌种为标普购买的第三代大肠埃希菌

供试液制备   取原辅料供试品10g/ml，加入90ml的缓冲液，制成1∶10供试液。即为供试液。

问题1：对于供试品的增菌培养是必须要做吗？

选择和分离培养  取上述供试品1ml接种至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时。

问题2：阳性对照是怎么做呢？是取＜100cfu的菌种接种至至100ml麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24～48小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18～72小时吗？

问题3：工作菌种说明书上是取0.1ml，菌种数量＜100cfu，那还需要做计数培养吗?

结果判断  若麦康凯琼脂培养基平板上有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，确证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性，判供试品未检出大肠埃希菌。

ilovehusky

1、必须
2、应该是供阳，控制菌加入含供试品的TSB中
3、需要计数

堂xgszuvzv

ilovehusky 发表于 2025-1-9 10:10
1、必须
2、应该是供阳，控制菌加入含供试品的TSB中
3、需要计数

好的，那买的是工作菌，还需要根据药典上做菌液制备吗？ 将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、沙门菌分别接种于胰酪大豆胨液体培养基中或胰酪大豆胨琼脂培养基上，30～35℃培养18～24小时；但菌种说明书上是8小时内用，您说的阳性对照可以具体讲下操作吗?小白不懂，求指点

ilovehusky

堂xgszuvzv 发表于 2025-1-9 13:19
好的，那买的是工作菌，还需要根据药典上做菌液制备吗？ 将金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、 ...

你买的是工作菌液，应该是按照厂家的方法复苏（比如买的是 ＜1000cfu/ml的，用1ml复溶液 复苏菌液，制成＜1000cfu/ml的菌液，取0.1ml涂布培养计数），具体的看下购买厂家的COA或操作说明书；
供阳制备：取供试液10ml加入100TSB，在加入＜100cfu/ml的大肠埃希菌菌液，按规定增菌培养，再转接，再划线

堂xgszuvzv

ilovehusky 发表于 2025-1-9 13:30
你买的是工作菌液，应该是按照厂家的方法复苏（比如买的是 ＜1000cfu/ml的，用1ml复溶液 复苏菌液，制成 ...

谢谢，明白啦，感谢大佬。

ilovehusky

堂xgszuvzv 发表于 2025-1-9 13:57
谢谢，明白啦，感谢大佬。

不客气，QC行业里的小学生

堂xgszuvzv

ilovehusky 发表于 2025-1-9 14:40
不客气，QC行业里的小学生

再也不想干QC

鬼使神差

问题1

供试品的增菌培养在这种情况下是必须要做的。增菌培养的目的是让可能存在的少量目标菌（大肠埃希菌）在合适的培养基和条件下大量繁殖，以便后续能够更准确地检测到它们。如果不进行增菌培养，当原辅料中大肠埃希菌含量较低时，可能会出现假阴性结果。

问题2

阳性对照不是这样做。阳性对照应该是取已知的、一定数量（例如10 - 100CFU）的大肠埃希菌标准菌株，直接接种到和供试品相同的麦康凯液体培养基（100ml）中，42 - 44℃培养24 - 48小时。然后取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30 - 35℃培养18 - 72小时。这样可以确保在整个实验过程中，检测系统能够正确地检测出大肠埃希菌，验证实验方法的准确性和可靠性。

问题3

如果工作菌种说明书上已经明确了取0.1ml，菌种数量＜100cfu，在某些情况下可以不做计数培养。如果对菌种的数量准确性要求不是极高，且说明书提供的接种量能够满足实验的阳性对照需求，就可以直接使用。但如果实验要求非常严格，需要精确知道接种的菌种数量，那么就需要进行计数培养。

堂xgszuvzv

鬼使神差 发表于 2025-1-9 18:57
问题1

供试品的增菌培养在这种情况下是必须要做的。增菌培养的目的是让可能存在的少量目标菌（大肠埃希 ...

好细致，老师您好，对于阳性对照、您说的直接将菌种接种到培养基，那这个过程不加供试品吗？不加的话怎么判断供试品是否影响菌种生长，出现假阴性这种情况

wangqian1

供试品阳性对照，菌液加入的是TSB（如果是直接接中法），一般加10-100cfu（0.1毫升）

ilovehusky

堂xgszuvzv 发表于 2025-1-9 15:20
再也不想干QC

年年难干年年干，小孩子才说想不想，牛马只会说好好好，马上干

堂xgszuvzv

，哈哈哈哈，真是

堂xgszuvzv

wangqian1 发表于 2025-1-11 15:12
供试品阳性对照，菌液加入的是TSB（如果是直接接中法），一般加10-100cfu（0.1毫升）

好的，收到

堂xgszuvzv

鬼使神差 发表于 2025-1-9 18:57
问题1

供试品的增菌培养在这种情况下是必须要做的。增菌培养的目的是让可能存在的少量目标菌（大肠埃希 ...

您好，我想问下对于医疗器械的无菌检查里阳性对照选择的是工作菌种，然后一般需要取0.1ml涂布计数吗?还是说只需要跟供试品加进去培养就行