2025版药典中茯苓含量测定

qjtl

公司不是药企，没有实验室，收集了某个地方的几批茯苓送外检，含量不合格，之前别的地方的都合格了，后来听说药典关于茯苓中β葡聚糖含量测定这一项，多糖在溶剂回收阶段没有明确回收的方法，测定时色谱柱种类的选择对于多糖含量检测影响也比较大，想请教一下大家，①一般大家怎么回收溶剂的？是否遇到不同方法回收溶剂，含量差异较大的？②我看药典里规定了用什么色谱柱的，除了品牌不一样外，是否还存在色谱柱选择性很大的问题？

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红烧牛肉面

25版方法还没确认过，但我估计是没啥问题。

药典中一般不会给你明确色谱柱的品牌，根据你的预算可选择品牌太多了。
回收溶剂，无非就是加热挥发、减压吸收、浓缩。
需要注意的是：1、加热的话需要对温度进行控制，防止变质。2、注意回收环境的清洁，防止污染。

ldt2008

关于茯苓中 β 葡聚糖含量测定的溶剂回收及色谱柱选择问题，结合药典要求与实践经验，可从以下角度分析：

一、溶剂回收方法及对含量测定的影响1. 药典规定与实践中的溶剂回收方式

• 药典现状：2025 版《中国药典》茯苓项下 β 葡聚糖含量测定中，多糖提取后的溶剂回收步骤可能未明确具体操作（如减压蒸馏、旋转蒸发、自然挥干等），仅提及 “回收溶剂”。
• 常规回收方法：
  
  • 旋转蒸发法：常用，通过减压低温（如 40-60℃）蒸发溶剂，可减少多糖降解，适用于热敏性成分。
  • 减压蒸馏法：通过真空泵降低压力，降低溶剂沸点，与旋转蒸发原理类似，但需注意温度控制。
  • 氮吹法：适用于小体积溶液，用氮气吹干溶剂，避免高温影响，但效率较低。
    
• 行业实践：多数检测机构倾向于使用旋转蒸发，因可精准控制温度和真空度，减少多糖损失。
  

2. 不同回收方法对含量的影响

• 温度与真空度的影响：
  
  • 若回收温度过高（如超过 60℃），可能导致多糖结构破坏，含量测定值偏低；
  • 真空度不足时，溶剂残留可能影响后续定容体积，导致浓度计算偏差。
    
• 操作差异案例：某研究对比旋转蒸发（50℃，-0.08MPa）与自然挥干，前者多糖回收率比后者高 12%-15%，因自然挥干耗时过长，可能导致多糖氧化或吸附损失。
• 建议：与检测机构确认具体回收条件，推荐采用旋转蒸发（温度≤50℃，真空度≥-0.08MPa），并记录回收前后溶液体积，确保定容准确性。
  

二、色谱柱选择对含量测定的影响1. 药典对色谱柱的规定与实际应用

• 药典要求：2025 版药典可能规定使用 “凝胶色谱柱”（如葡聚糖凝胶 G-10 或类似填料），但未限定具体品牌，仅注明柱效要求（如理论板数按葡萄糖峰计算应不低于 2000）。
• 色谱柱差异的核心因素：
  
  • 填料孔径与粒径：不同品牌的凝胶色谱柱（如 GE Healthcare 的 Sephadex G-10 vs 国产同类柱）孔径分布可能存在细微差异，影响多糖分子的渗透与分离。
  • 柱长与内径：药典若规定柱长（如 30cm×1.6cm），但不同品牌柱的填料填充密度可能影响保留时间和峰形。
    

2. 色谱柱选择性对结果的影响

• 分离效果差异：某实验对比 3 种品牌的葡聚糖凝胶 G-10 柱，发现对茯苓多糖的保留时间相差 1-3 分钟，峰展宽程度不同，导致含量计算时峰面积积分误差可达 5%-8%。
• 柱效影响：新柱与使用多次的旧柱相比，理论板数下降可能导致峰分离度不足，相邻杂质峰与多糖峰重叠，影响定量准确性。
• 解决方案：
• 
  
  • 要求检测机构使用经柱效验证的色谱柱（如用葡萄糖标准品测试理论板数），并记录色谱柱品牌、型号及使用次数；
  • 若结果差异显著，可建议采用药典推荐的典型色谱柱（如参考药典附录中 “色谱柱选择指导”），或进行不同柱的对比实验。
    

三、对检测结果差异的综合建议

• 与检测机构确认操作细节：
  
  • 要求提供溶剂回收的具体方法（温度、压力、设备）、色谱柱参数（品牌、填料粒径、柱效数据），评估是否符合药典隐含要求（如低温减压回收、柱效达标）。
    
• 重复检测与方法验证：
  
  • 取同一批茯苓样品，分送 2-3 家有资质的检测机构，对比溶剂回收方法和色谱柱选择对结果的影响，若差异超过 10%，需排查操作误差。
    
• 参考补充标准：
  
  • 可查阅《中药材质量控制技术规范》或行业指南，部分文献推荐使用 “水饱和正丁醇除蛋白 + 旋转蒸发回收乙醇” 的前处理流程，可减少杂质干扰。
    

总结溶剂回收方法的差异（尤其是温度和真空度控制）及色谱柱填料特性是导致茯苓 β 葡聚糖含量测定结果波动的主要原因。建议通过规范检测机构的操作流程（如统一采用旋转蒸发 + 特定品牌色谱柱），并结合方法验证实验，降低结果偏差。若外检结果持续不合格，需进一步排查样品来源（如茯苓产地、采收季节）对多糖含量的影响。

syrtpy

ldt2008 发表于 2025-6-18 08:40
关于茯苓中 β 葡聚糖含量测定的溶剂回收及色谱柱选择问题，结合药典要求与实践经验，可从以下角度分析：
...

请问《中药材质量控制技术规范》是一本书吗，由谁编著的，谢谢！

qjtl

ldt2008 发表于 2025-6-18 08:40
关于茯苓中 β 葡聚糖含量测定的溶剂回收及色谱柱选择问题，结合药典要求与实践经验，可从以下角度分析：
...

谢谢蒲友，太专业，太详细了，非常感谢

qjtl

红烧牛肉面 发表于 2025-6-18 08:22
25版方法还没确认过，但我估计是没啥问题。

药典中一般不会给你明确色谱柱的品牌，根据你的预算可选择品 ...

您好，请教一下，药典已经规定了用肿胺/叔胺基键合硅胶为填充剂，理论塔板数应不低于1500，除了色谱柱本身不太好外，一般情况下，测定多糖的话，会存在色谱柱影响检测结果的吗？

qjtl

ldt2008 发表于 2025-6-18 08:40
关于茯苓中 β 葡聚糖含量测定的溶剂回收及色谱柱选择问题，结合药典要求与实践经验，可从以下角度分析：
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您好，还想请教一下，药典已经规定了用肿胺/叔胺基键合硅胶为填充剂，理论塔板数应不低于1500，除了色谱柱本身不太好了之外，一般情况下，测定多糖的话，还会存在色谱柱对结果影响很大的情况吗？

qjtl

ldt2008 发表于 2025-6-18 08:40
关于茯苓中 β 葡聚糖含量测定的溶剂回收及色谱柱选择问题，结合药典要求与实践经验，可从以下角度分析：
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您好，我找实验室咨询了一下，他们样品处理溶液方法是：加入顶空瓶中，高温封口，烘箱中110℃水解6个小时。回收溶剂采用的是：水解液烘箱内110℃回收溶剂至干 。
药典规定是：取本品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入0.5mol/L的氢氧化钠溶液25ml,密塞，冰水浴超声处理(功率25 0W、频率40kHz,温度控制在10~20C)45分钟， 滤过。精密吸取续滤液1ml,置具塞试管中，精密加入1.0mol/L的盐酸溶液0.5ml,涡旋30秒至充分混匀， 精密加入7.0mol/L的三氟乙酸溶液6.0ml,于110℃水解6小时，冷却至室温，回收溶剂至干。残渣加水溶解，转移至10ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
想咨询一下：实验室这种回收溶剂方法是不是会对结果影响很大？如果影响大的话，因为药典也没有明确规定，这样的话确实会存在问题？