pupsit的残留水会影响APS时培养基的促生长能力吗？

leaves

各位大佬，公司现在打算引入pupsit，因为没有用压缩空气吹（担心吹破滤芯），所以测试完之后有100多g的残留水。引入pupsit属于中等变更，需要做完3批APS才能引入，现在问题就来了。这100多g的残留水最后会进入到过滤前端的培养基中，目前的策略是排掉初始过滤的200ml，然后其他就进入缓冲袋进行灌装。根据法规要求（EU 附录I，国内2025附录I），除菌过滤后的培养基都应该要培养，除非正常生产流程也是废弃的，这里引出第一个问题：正常生产流程其实也会排掉200ml的药液，能否通过风险评估，在APS中排掉这200ml不培养？因为这200ml浓度已经不是3%了，即使有菌也不一定能长出来，促生产试验也不一定符合要求。然后另外过滤到缓冲袋里的，其实浓度也会有变化，因为当时的策略排200ml后药液浓度并达不到合格，而是在缓冲袋（5L）中达到合格，所以这里就会有第二个问题：缓冲袋中的培养基浓度会比3%低，这种情况有菌也不一定能长出来，促生产试验也不一定符合要求。
所以想请教下同行的大佬，用pupsit进行APS的时候，怎么考虑残留水的影响的？如果没有残留水，也希望可以探讨下减少残留水的操作。谢谢。

充满乡音的口吻

你们PUPSIT是怎么设计的，可以分享一下吗？

世间始终你好

先说结论，再给可落地做法。
一句话结论

• 初始排空的200 mL：在APS中可以按与日常生产相同的情形排掉且不计入APS合格判定；但需要在批记录中逐一对账并给出书面理由，通常建议单独收集并培养作为信息性样品（不并入合格判定）。这是EU Annex 1 §9.41–9.47的原话逻辑。
  
• 被PUPSIT残留水稀释的培养基：两条路都合规——(A) 通过工艺和硬件把稀释降到可忽略；(B) 接受稀释，但要用最不利稀释度做促生长与恢复性验证，证明仍能可靠检出污染（Annex 1 §9.33–9.37、§9.36.vi–vii）。
  
• 减少残留水：优先考虑产品湿润（product-wet）/按厂家允许的“非水”润湿介质做PUPSIT，或设计可完全排干的安装姿态与放空/顺排程序；Annex 1 §8.85明确“完整性测试的润湿液可依据滤器厂家建议或被过滤介质本身”。
  
  

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针对你提出的两个具体问题1) APS里能否把“日常也会废弃的首200 mL”排掉且不培养？可以，但要满足三点“钉死”它与日常一致：

• 情形对等：介入类型、线体位置、数量，与SOP里日常规定一字不差地一致（Annex 1 §9.41–9.47）。
  
• 对账与理由：APS记录里要有已灌、已培养、未培养的逐项对账，并写明“与日常同因排除”（同条款要求）。
  
• 信息性培养（强烈建议）：将这些“装置设定/强制清线产生”的单位单独收集并培养，独立判读（通常不纳入APS合格判定），用于理解设定/清线阶段的风险（Annex 1 §9.41–9.47给到了“通常会单独培养”的示例表述）。
  
  

你担心“浓度不是3%，有菌也不一定长”。合规做法是：按最差稀释度做促生长/抑制性评估，证明哪怕是“首200 mL条件”，也不抑制代表性微生物的生长；若有抑制，就把这部分样品定位为信息性，并以等价的替代手段（下面给到）覆盖检测能力。

2) 缓冲袋（5 L）里因为混入残留水导致培养基浓度低于目标两种合规路径任选其一，或组合：

• 路径A：工程与程序消减稀释到可忽略
  
  
  • 顺排到废液：在开始收集APS单位前，顺排至电导/折光/TOC稳定（定义“稳定阈值”），再转入收集；把该阈值写进SOP与批记录。
    
  • 可完全排干的安装：垂直“自上进下出”、最低点放空、壳体倾角>5°、滤前/后均设底部排液点，安装完成做“重力排尽+滴尽时间确认”。
    
  • 低压惰性气体顶推：若厂家允许，对下游进行**受限压力（例如≤0.2–0.3 bar）**的无菌氮气或无菌空气“顶推-放空-再顶推”，配合在线压力保护阀，避免膜损。
    
  • 改用产品/缓冲液润湿并做完整性：若滤膜厂家给出以产品或工艺缓冲液作为润湿液并提供等效拦截/扩散限值，可PUPSIT后无需额外水润湿，几乎消除稀释（Annex 1 §8.85 支持“按厂家建议或用被过滤介质作为润湿液”）。
    
    
• 路径B：验证稀释仍具检测能力
  
  
  • 最不利稀释度GPM：用你计算的最大稀释倍数（例如残水100 g混入X L）配制“等效最低浓度培养基”，按药典要求用低接种量做促生长/抑制性—证明仍能可靠长出（Annex 1 §9.36.vi–vii、§9.37）。
    
  • 双路径检测：对“首200 mL信息性样品”和“缓冲袋主体样品”分别培养；如担心低浓度导致灵敏度下降，可并行做膜过滤回收法（把一定体积通过0.45 µm膜后转种在标准浓度琼脂/肉汤），提高检出概率。
    
  • 方法学证明：把上述最差稀释度下的可检出性（LOD）与恢复率写成一页验证摘要，装订进APS方案/报告的“理由与等效性”章节（Annex 1 §9.33–9.37强调APS不能被抑制、应可靠检出污染）。
    
    

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“没有残留水”/“把残留水做到最小”的实操清单

• 与滤膜厂家确认“产品湿润/缓冲湿润完整性测试”可行性与限值（很多0.2 µm亲水膜都提供产品扩散限值或相应换算），以避开“水润湿→残水”。依据：Annex 1 §8.85 对润湿液的规定。
  
• 硬件布置：立式自排尽壳体、最低点放空、上端疏水排气，所有低点都能不经拆卸排尽；必要时选低滞留体积的装置与接头。
  
• 顺排至稳定阈值：定义“开始收集前必须满足：电导≤X µS/cm、或折光/密度恢复到目标±Y%”；把这段全部计入“日常同因排除的单位”，在APS里按§9.41–9.47记录与说明。
  
• 受限气体顶推：若担心压缩空气损膜，改用0.22 µm过滤的氮气且设置压力上限阀；选择厂家认证的最大允许ΔP，并做一页风险评估+操作确认（参考滤器IFU）。
  
• 预浓缩补偿：按最大稀释量把上游培养基预设过量浓度（例如配制成“目标×(1+最大稀释%)”），混合后刚好回到目标；并对“预浓缩—混合后”做GPM。
  
• 信息性样品：将所有设定/清线/强制排空段单独收集并培养，既满足监管期望，又避免把“非代表性单位”拉低APS统计判定（§9.41–9.47提供了这种处理方式）。
  
  

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计算与文件化要点（示例框架）

• 最差稀释度＝（残留水质量/密度）÷（目标收集段体积）；据此推导“培养基最低浓度”。
  
• 决策阈值：当最差稀释度≤例如1–2%且GPM无差异，可判定“可忽略”；>2%则采取“预浓缩/顺排/双路径检测”之一。
  
• APS方案里固定：
  
  
  • “与日常一致的排除情形、体积、位置、介入类型、对账”；
    
  • “开始计数的时间点/条件（电导/密度阈值）”；
    
  • “被排除单位的单独培养与判读方式”；
    
  • “最差稀释度下的GPM/可检出性证明”。（均对应Annex 1 §9.33–9.47）
    
    

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关于“国内2025附录I”的一致性国家层面的新版无菌附录（征求意见稿/更新）总体与EU Annex 1靠拢，强调CCS、APS真实性、PUPSIT的风险评估与数据支撑。因此，上述做法同样契合“按日常真实再现+不抑制检出能力”这两条主线。

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小结（给QA/合规同事看的两句话）

• 可以在APS里不培养首200 mL，前提是与日常排除完全等同、逐项对账并单独信息性培养（Annex 1 §9.41–9.47）。
  
• PUPSIT残水要么工程上消掉，要么验证它不影响检出能力；优先争取产品/缓冲湿润+可排尽安装+顺排至稳定阈值（Annex 1 §8.85、§9.33–9.37）。
  
  

胜利者

哈哈

leaves

充满乡音的口吻 发表于 2025-8-14 12:15
你们PUPSIT是怎么设计的，可以分享一下吗？

pupsit的设计现在已经很成熟了，国外默克、sus，国内乐纯、科百特，都可以去看看。还是说你有什么想讨论的？说出你的疑惑

leaves

没有大佬来指点迷津吗