破伤风发酵培养基

少年游owy

各位大佬，破伤风发酵用的培养基需要加入动物源性的材料吗，有具体的配方没，我看药典上说的是疱肉培养基，这个不太好离心吧，感谢

世间始终你好

可以不一定要用动物源性的“熟肉（Cooked Meat/Robertson）培养基”。思路是：

• 用熟肉培养基做复苏/初代种子（它确实长得旺、耐氧化还原低），
• 之后转入无动物源或低动物源的种子/发酵培养基做扩大与产毒，这样更方便离心、也利于动物源规避与注册合规。
  

下面给你几套常用、实操友好的配方（g/L），你可按场景选择。
1) 复苏/保种（可选）：熟肉培养基（含动物源）

• 肉块（牛心或瘦肉，切1–2 cm³、预先煮熟脱脂） 100–150
• 蛋白胨 10
• 牛肉膏 10
• NaCl 5
• 水至 1 L，pH 7.2±0.2
  要点：灌装后厌氧处理（煮沸驱氧或N₂置换），加少量复染指示剂如瑞香素（可选）。用于冻干管或保藏菌的复苏、首传；不建议把这锅直接拿去离心，先把肉块捞出或用粗滤网过滤，再转接到澄清培养基里扩大。
  

2) 种子扩大：RCM/硫代乙二酸盐型（澄清、易离心）（A）类RCM（含动物源）

• 蛋白胨 10
• 牛肉膏/提取物 10
• 酵母浸粉 3
• 葡萄糖 5
• 可溶性淀粉 1
• NaCl 5
• 乙酸钠 3（有助降低氧化还原）
• KH&#8322O₄ 0.5，Na₂HPO₄ 0.5（缓冲）
• L-半胱氨酸 0.5 或 硫代乙二酸钠 0.5（还原剂）
• 水至1 L，pH 7.0–7.2
  

（B）无动物源（植物/酵母基）

• 大豆胨 10
• 酵母浸粉 3–5
• 葡萄糖 3–5
• 可溶性淀粉 1
• NaCl 5
• 乙酸钠 3
• KH&#8322O₄ 0.5，Na₂HPO₄ 0.5
• L-半胱氨酸 0.3–0.5 或 硫代乙二酸钠 0.5
• 水至1 L，pH 7.0–7.2
  

用途：摇瓶或小罐种子（静止或微搅拌厌氧）。这两版都澄清、易过滤/离心，比熟肉基方便很多。
3) 产毒发酵培养基（推荐，无动物源示例）

• 大豆胨 20
• 酵母浸粉 5
• 可溶性淀粉 5（提供缓释碳源，避免酸过快积累）
• 葡萄糖 1.5–2（产毒宜碳源偏低，氮源偏高）
• NaCl 5
• KH&#8322O₄ 1.5，Na₂HPO₄ 3.5（pH/缓冲）
• MgSO₄·7H₂O 0.2
• FeSO₄·7H₂O 0.005，MnSO₄·H₂O 0.005（痕量金属促进生长与产毒）
• 硫代乙二酸钠 0.5 或 L-半胱氨酸 0.3（还原剂）
• （可选）瑞香素 1 mg/L（氧化还原指示）
• 水至1 L，起始 pH 7.2±0.1
  

工艺要点（普适于产毒）

• 厌氧环境：发酵前N₂或N₂/CO₂充分置换；搅拌尽量低剪切，溶氧≈0。
• 温度：34–36 °C。
• pH：控制在 7.0–7.4；若酸化，可滴加Na₂CO₃溶液或氨水调节。
• 接种量：2–5%（对数期种子）。
• 时间：一般 48–72 h 观测毒素滴度上升平台。
• 起始还原：培养基配好后可先煮沸5–10 min驱氧，冷却厌氧静置过夜，或充氮并加入还原剂。
• 消泡：选用可登记的聚醚/聚丙二醇类（注意后处理与法规相容）。
• 收获：粗滤去絮体 → 离心澄清上清 → 下游纯化/灭活（如制类毒素时常用甲醛灭活，工艺需内控验证）。
  

4) 关于你提到的“疱肉培养基”药典和很多教材里写的“熟肉培养基”（也有人口语写成“泡/疱肉培养基”）就是含熟肉块的那种。它确实不方便离心。实操上通常这样避坑：

• 只用于复苏/首传；长好后用无菌吸管取上清或经粗滤网去肉渣，再转接到澄清的种子/发酵培养基里；
• 或者直接用硫代乙二酸盐流体培养基或类RCM作为首代（完全无肉块），前提是你们的保种/活化方案已经验证可行。
  

5) 是否必须加动物源？**不是必须。工业与注册趋势是尽量采用无动物源（AOF）**的胨/氨基酸来源（如大豆胨、酵母浸粉），既减少疯牛病等风险，也简化合规沟通。但切换配方需要做：

• 生长与产毒性能比对（滴度、动力学）；
• 质量/安全相关杂质评估（如内毒素、残留还原剂、消泡剂）；
• 工艺等效与稳定性验证（≥3批，按你们变更等级和SOP）。
  

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少年游owy

好的，非常感谢大佬的讲解