聚丙烯药用滴眼剂瓶的无菌检查

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想请教一下各位老师，药用滴眼剂瓶选择什么方法做无菌检查，是用0.9%无菌氯化钠溶液冲洗合并过滤还是直接把滴眼剂瓶剪碎直接接种？

环湖

对于药用滴眼剂瓶的无菌检查，首选且最符合法规和科学性的方法是：采用0.9%无菌氯化钠溶液或其他适宜冲洗液进行冲洗，合并冲洗液，然后进行薄膜过滤法检查。

不推荐直接将滴眼剂瓶剪碎后接种到培养基中。 这种方法存在重大缺陷，通常不被监管机构（如NMPA、FDA、EMA）接受作为放行检验方法。

下面详细解释两种方法的优劣、选择依据和标准操作。

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方法对比与选择依据




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特性	冲洗液冲洗 + 薄膜过滤法	直接剪碎接种法
原理	用足量冲洗液将容器内壁可能存在的微生物洗脱下来，收集全部冲洗液，通过滤膜富集微生物，然后培养滤膜。	将容器破坏后直接与培养基接触，依赖微生物在培养基中生长扩散。
方法优势	1. 灵敏度高：大体积冲洗（通常≥100mL）可检测低水平污染。 2. 可消除抑菌性：冲洗可稀释产品中的防腐剂（如苯扎氯铵），并通过冲洗滤膜进一步消除其抑菌性。 3. 代表性好：能有效覆盖整个内表面。 4. 药典认可：《中国药典》通则1101无菌检查法明确规定，对于“装置容量大于100mL的供试品”（滴眼剂瓶属于此类），应采用薄膜过滤法。	1. 操作看似简单直接。 2. 适用于无法用冲洗法有效检测的供试品（如油剂、软膏），但这不是滴眼剂的常规情况。
方法劣势	操作步骤稍多，需无菌过滤装置。	1. 灵敏度低：接种体积小（通常仅15-20mL培养基），无法检出低水平污染。 2. 抑菌性干扰强：防腐剂直接接触培养基，严重抑制微生物生长，易导致假阴性。 3. 回收率差：微生物可能被包裹在塑料碎片中，无法有效接触培养基。 4. 不符合药典：不符合药典对“大容量装置”的检测要求。 5. 易引入外源性污染：剪碎操作本身风险高。
法规符合性	完全符合《中国药典》/《USP》/《EP》要求。	不符合放行检验的法规要求，仅可作为特殊情况下的辅助或调查方法。

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标准操作流程（冲洗液冲洗+薄膜过滤法）

以下是根据《中国药典》通则1101制定的核心步骤：

1. 方法适用性试验（首次检验或产品变更时必须做）
- 目的：证明该方法能有效检出微生物，且供试品（含防腐剂）的抑菌性已被消除。
- 操作：在供试品中加入少于100 CFU的阳性对照菌（如金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌、黑曲霉孢子），然后按上述方法操作。试验组微生物必须生长良好，与阳性对照组比较，回收率不低于70%。

2. 供试品检查（日常检验）
- 取样量：通常取至少20个最小包装单元（具体数量需根据药典附录的“无菌检查样品数量表”确定）。
- 冲洗液：使用0.9%无菌氯化钠溶液或pH 7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液。
- 操作步骤：
    1. 在无菌环境下，用无菌操作打开滴眼剂瓶。
    2. 向每个瓶中加入一定体积（如10-20mL）的冲洗液，剧烈振荡或使用超声波震荡，确保内壁完全润湿和洗脱。
    3. 将所有供试品瓶的冲洗液合并到一个无菌容器中。这就是你的“供试液”。
    4. 使用无菌薄膜过滤装置（滤膜孔径通常为0.45μm），将全部供试液过滤。
    5. 用足量的冲洗液（通常每次100mL）冲洗滤膜至少3次，以彻底消除防腐剂的抑菌性。
    6. 过滤完成后，无菌操作将滤膜取出，分别贴于两份硫乙醇酸盐流体培养基和两份胰酪大豆胨液体培养基中。
- 培养与观察：
    - 硫乙醇酸盐流体培养基管在30-35℃ 培养14天，用于检查需氧菌和厌氧菌。
    - 胰酪大豆胨液体培养基管在20-25℃ 培养14天，用于检查霉菌和酵母菌。
    - 每天观察是否有微生物生长。

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为什么不能简单剪碎接种？—— 关键风险点

1.  防腐剂干扰：滴眼剂普遍含有防腐剂。直接将含防腐剂的药液和容器碎片浸入培养基，会形成局部高浓度抑菌区，杀死或抑制可能存在的污染微生物，导致严重的假阴性结果，这是最大的质量风险。
2.  检测能力不足：无菌检查的核心理念是检测低概率、低水平的污染。剪碎法接种体积小，无法浓缩样品，检测限很差。
3.  操作不一致性：剪碎的碎片大小、形状不一，与培养基的接触面积不可控，导致结果重现性差。

总结与建议

- 放行检验：必须使用冲洗液冲洗合并+薄膜过滤法，并完成方法适用性验证。这是满足国内外药典法规要求的唯一正确路径。
- 调查辅助：只有在进行偏差调查、污染菌鉴定时，如果怀疑微生物被“固定”在瓶壁某处，才可能考虑将特定的、可疑的单个瓶子剪碎，直接接种到大量培养基中进行增菌复活尝试，但这属于调查性测试，不能作为产品放行的依据。
- 文件记录：所有操作必须依据详细的SOP，并在无菌检查记录中完整记录取样数量、冲洗体积、冲洗次数、培养条件等信息。

请务必在公司的QC规程中明确规定采用薄膜过滤法，并确保检验人员经过严格培训。这是保障滴眼剂无菌安全、规避监管风险的基石。

羽遥

优先用0.9% 无菌氯化钠溶液冲洗内壁后合并冲洗液过滤；
剪碎直接接种易干扰结果，不符合药典无菌检查通则要求