实验室用高压灭菌锅灭菌效果验证

微信bjc4fhly

我们实验室的手提式高压蒸汽灭菌锅，做微生物限度实验的，也会偶尔真菌霉菌灭活，现在需要验证灭菌效果，以前好像没做过，想请问一下各位，我现在需要根据药典中湿热灭菌法来做满载或空载热分布、热穿透、生物指示剂等试验吗？（ps:灭菌锅给计量局检定了的，出的报告是灭菌锅自带温度计的校准，这个可以作为空载热分布证据吗？）

世间始终你好

你们的这个情况比较典型，下面我分点详细答复：

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一、是否需要做灭菌效果验证？需要。
虽然是实验室用的手提式高压蒸汽灭菌锅，而且是用于微生物限度检查（非无菌药品的微生物检验），但只要用于微生物学实验、对结果有影响的设备都必须验证其灭菌效果。这符合药典及GMP对“检验用设备”的基本要求，特别是：

《中国药典》（如2020版四部）“1101 微生物限度检查法”前言中明确提出，所用试剂、器具应无菌，无菌可通过高压蒸汽灭菌或其他适当方法实现，并验证其效果。

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二、需要做哪些验证内容？手提式灭菌锅虽然小型，但作为灭菌设备，验证内容不应完全省略，但可简化处理。建议包括以下三方面：
1. 空载热分布（可视情况简化）

• 目的是确认灭菌锅内部各点是否达到设定温度（如121℃），温差是否在允许范围（±2~3℃）。
  
• 如果你只有一个内置温度计，建议：
  
  
  • 如果计量局校准证书中记录了多个点的测试结果（例如放在锅内不同位置的探头），可以部分替代空载热分布试验；
    
  • 如果校准仅是对锅自带温度计的单点校准，不能代替空载热分布，仍建议自己做一次简单的热分布测试（比如放入多个温度指示卡或一次性温度指示器观察各点温度一致性）。
    
    

2. 满载热穿透试验（推荐做）

• 验证灭菌锅在你实际使用条件下（如灭菌培养基、玻璃器具、滤膜等）的负载状态下中心部位是否能达到规定温度并维持一定时间。
  
• 可使用：
  
  
  • 化学指示卡（如B级指示卡）置于最难穿透的位置；
    
  • 或温度探头记录温度曲线（简化处理时也可用温度计或温度变色贴条记录）。
    
    

3. 生物指示剂试验（强烈建议做）

• 使用枯草芽孢杆菌芽孢条（ATCC 7953），放置在最难穿透的位置，灭菌后取出培养。
  
• 灭菌后应 无生长，对照条应生长良好。
  
  

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三、如何简化执行？实验室手提式灭菌锅使用频率不高、空间有限，可以适度简化，例如：

• 空载热分布可以用**一次性温度指示条（变色型）**放锅内不同位置观测温度一致性；
  
• 满载热穿透用你实际灭菌的器具模拟操作，并加一条温度变色贴/化学指示卡；
  
• 生物指示剂只需选择一次灭菌后培养，无菌则通过。
  
  

一般不要求你配置记录仪等专业设备，但验证过程和结果应形成SOP与记录文档保存。

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四、总结建议验证项目是否必须简化建议
空载热分布建议做如校准报告含内部多点，可参考；否则需补做
满载热穿透必做用化学指示卡或温度贴简化执行
生物指示剂必做枯草芽孢杆菌芽孢条，培养观察无生长即可

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微信bjc4fhly

世间始终你好 发表于 2025-8-4 14:03
你们的这个情况比较典型，下面我分点详细答复：

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一、是否需要做灭菌效果验证？需要。
虽然是实验室 ...

非常感谢老师提出的，很明确哈哈哈，就是还有个疑问我不能选择嗜热脂肪地芽孢杆菌作为生物指示剂吗（纯疑问，因为确实对这方面知识较欠缺）

世间始终你好

微信bjc4fhly 发表于 2025-8-4 14:19
非常感谢老师提出的，很明确哈哈哈，就是还有个疑问我不能选择嗜热脂肪地芽孢杆菌作为生物指示剂吗（纯疑 ...

不推荐选择嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）作为你们实验室用手提式高压蒸汽灭菌锅的生物指示剂，原因如下：

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推荐使用的生物指示剂在《中国药典》及药品GMP实际操作中，湿热灭菌的生物指示剂明确推荐：

枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis，ATCC 9372）或
枯草芽孢杆菌黑色变种（Bacillus subtilis var. niger，现多指ATCC 7953）

这类菌种的耐热性更贴近普通实验室使用环境及设备（如小型灭菌锅），适合验证灭菌条件是否满足121℃，15~30 min等常规灭菌条件。

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为什么不推荐嗜热脂肪地芽孢杆菌？项目枯草芽孢杆菌（ATCC 9372 / 7953）嗜热脂肪地芽孢杆菌（ATCC 7953、ATCC 12980 等）
最适生长温度30~37°C55~60°C（嗜热）
使用场景普通湿热灭菌（121℃）验证更适用于高压蒸汽灭菌器的验证（如134℃）
推荐标准中国药典、GMP常规使用药典用于医疗器械或高温灭菌验证
培养要求常规TSA或NA，培养箱37℃即可必须55~60℃恒温箱，培养基要求更高如果你们实验室没有嗜热菌培养能力（55~60℃培养箱）或使用灭菌锅也只是121℃范围，使用嗜热脂肪地芽孢杆菌：

• 可能因为其过度耐热性而误判灭菌失败；
  
• 或因为无法适当培养观察而得不到有效验证结果。
  
  

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实际建议

• 首选： 枯草芽孢杆菌（如ATCC 7953，常规湿热灭菌验证用）；
  
• 选择商品： 市面上常见芽孢条、芽孢片，如MESALabs、3M、Steris、国产某些品牌都有供应；
  
• 培养温度： 37°C，培养48小时左右看是否生长。
  
  

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额外建议如果你们实验室需要做一些较高温灭菌（如灭活高危真菌、细菌孢子等），并考虑用嗜热脂肪地芽孢杆菌做灭菌挑战，那需确保：

• 灭菌锅确实运行温度能稳定到121~134°C；
  
• 有嗜热菌专用恒温箱；
  
• 可使用专门的生物指示剂（如3M的紫色标头芽孢片），并有详细操作SOP。
  
  

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过渡々

灭器具、培养基、稀释剂的灭菌锅和灭活的灭菌锅要分开使用，防止交叉污染。至少需要两台灭菌锅。

红烧牛肉面

学习一下

微信bjc4fhly

世间始终你好 发表于 2025-8-4 14:21
不推荐选择嗜热脂肪地芽孢杆菌（Geobacillus stearothermophilus）作为你们实验室用手提式高压蒸汽灭菌锅 ...

哈哈谢谢老师的回答，解决了我的疑问，又学到了

微信bjc4fhly

过渡々 发表于 2025-8-4 14:21
灭器具、培养基、稀释剂的灭菌锅和灭活的灭菌锅要分开使用，防止交叉污染。至少需要两台灭菌锅。

收到，谢谢老师，我们有两台的

世间始终你好

微信bjc4fhly 发表于 2025-8-4 14:37
哈哈谢谢老师的回答，解决了我的疑问，又学到了

改天把学费交一些，或者在我这多采购几箱丁腈手套

微信bjc4fhly

世间始终你好 发表于 2025-8-4 14:39
改天把学费交一些，或者在我这多采购几箱丁腈手套

哈哈请问你们是什么牌子，我虽然不负责采购，但是可以去和他们沟通一下

世间始终你好

微信bjc4fhly 发表于 2025-8-4 14:41
哈哈请问你们是什么牌子，我虽然不负责采购，但是可以去和他们沟通一下

18251470560，先聊聊，可以先提供你们现有的品牌

凯rq8rec5y

    学习一下

hana1

需要做验证，一般做空、满载，热分布、热穿透这些项目，看灭菌工艺选择适宜的生物指示剂，过度杀灭法用嗜热脂肪芽孢杆菌，热不稳定物品灭菌用枯草芽孢杆菌等，指示剂都有市售的，可以根据使用场景看说明书来选择

依然星期三

物品灭菌和废弃物灭活的高压锅最少分开。都需要做确认

华重楼

学习了

Neuro_psycho

世间始终你好 发表于 2025-8-4 14:42
18251470560，先聊聊，可以先提供你们现有的品牌

gpt合租20一个月，你这宣发成本也是性价比极致了

世间始终你好

Neuro_psycho 发表于 2025-8-4 15:29
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免费的，还没开始花钱，另外是20美金一月

世间始终你好

Neuro_psycho 发表于 2025-8-4 15:29
gpt合租20一个月，你这宣发成本也是性价比极致了

另外我也没有强迫任何一个人买东西

预则立，不预则

学习到了，感谢分享。。。

微信bjc4fhly

世间始终你好 发表于 2025-8-4 14:42
18251470560，先聊聊，可以先提供你们现有的品牌

哈哈哈老师这里暴露电话号码，不怕被轰炸吗