纯化水微生物检验

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麻烦问一下大家纯化水微生物限度检验的操作流程  麻烦啦

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药典二部《纯化水》以及通则1105，写的很清楚啊

木每（méi）

25版药典里四部0261制药用水里有的。：纯化水取不少于1ml，经薄膜过滤法处理，采用R2A琼脂培养基，30-35℃培养不少于5天。1ml供试品中需氧菌总数不得过100cfu。

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微生物限度仪会用吧

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木每（méi） 发表于 2025-8-16 08:43
25版药典里四部0261制药用水里有的。：纯化水取不少于1ml，经薄膜过滤法处理，采用R2A琼脂培养基，30-35℃ ...

可是为什么有的人说要用到7.0缓冲液呀   有的说用缓冲液冲完再过滤纯化水有的说用100ml缓冲液加入1ml纯化水摇匀过滤  我想到底咋办

木每（méi）

13030025870 发表于 2025-8-16 10:21
可是为什么有的人说要用到7.0缓冲液呀   有的说用缓冲液冲完再过滤纯化水有的说用100ml缓冲液加入1ml纯化 ...

要用啊，1ml纯化水倒进去，滤膜都没湿完呢，用100ml的pH7.0的缓冲液冲一下，浸湿滤膜

不见猫骨头

先用冲洗液润膜（至于说用氯化钠溶液还是pH7.0看你们自己，润膜量看你们自己规定，能让膜湿润就行，你们在SOP里面自己规定），取不少于1ml样品（具体的取样量你们自己定）加入冲洗液中（50ml还是100ml抑或其它量自己定，文件规定清楚，这一步是为了分散菌，万一菌太多可能会聚在一起，计数不准确），冲洗后再加和上一步一样量的冲洗液，可能有菌残留在滤杯壁上，冲洗下来，过滤完全，正面朝上贴于R2A表面，30~35℃培养不少于5天，一般建议是不少于7天，水系统特有的菌有些生长缓慢

13030025870

不见猫骨头 发表于 2025-8-18 12:33
先用冲洗液润膜（至于说用氯化钠溶液还是pH7.0看你们自己，润膜量看你们自己规定，能让膜湿润就行，你们在S ...

老师这个怎么计数呀  是滤膜上长了几个菌就记几个菌吗

不见猫骨头

13030025870 发表于 2025-8-19 08:17
老师这个怎么计数呀  是滤膜上长了几个菌就记几个菌吗

对，结果需要除以取样量，例如取样量是1ml，有10cfu的菌，结果就是10cfu/ml；如果是取样量是5ml，同样是10cfu的菌，结果就是10cfu/5ml，也就是2cfu/ml

安安份份的小尘1

根据《中国药典》四部通则1105 非无菌产品微生物限度检查法及GMP规范要求，纯化水微生物限度检验的标准操作流程如下（重点步骤已加粗）：

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一、检验前准备

  1. 环境要求：

       在洁净度10,000级背景下的局部100级单向流超净台内操作（避免环境污染）。

  2. 物料灭菌：

       0.45μm滤膜（孔径）及滤器（121℃灭菌30分钟）；

       培养基：营养琼脂（细菌）、玫瑰红钠琼脂（霉菌酵母菌），按说明书灭菌；

       无菌稀释液（如pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液、生理盐水）。

  3. 仪器校准：

       生物安全柜、培养箱（温度验证）、薄膜过滤装置。

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二、样品处理与过滤

  1. 取样量：

       常规检测取≥200ml纯化水（若预期污染严重可增加体积）。

  2. 过滤操作（无菌环境下）：

       用无菌镊子将滤膜装入滤器；

       注入纯化水样品，开启真空泵抽滤（控制流速避免滤膜破裂）；

       过滤结束，用100ml无菌缓冲液冲洗滤膜（去除可能的抑菌成分）。

  3. 滤膜转移：

       用无菌镊子将滤膜贴于培养基表面：

           营养琼脂平板→ 细菌培养；

           玫瑰红钠琼脂平板→ 霉菌和酵母菌培养。

       确保滤膜与培养基紧密接触（无气泡）。

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三、培养与计数

【表格】
检测目标        培养基        培养条件        培养时间       
细菌总数        营养琼脂        30~35℃        3~5天       
霉菌&酵母菌总数        玫瑰红钠琼脂        23~28℃        5~7天

   菌落计数：

       肉眼或菌落计数器计数，滤膜上菌落数控制在20~200 CFU（超过需稀释重测）；

       计算公式：

微生物数量（CFU/ml）= 平均菌落数 × 稀释倍数 / 取样体积（ml）

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四、结果判定（药典标准）

   纯化水合格限值：

       细菌、霉菌及酵母菌总数 ≤ 100 CFU/ml

       若检出控制菌（如大肠埃希菌）→直接判定不合格。

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五、关键注意事项

  1. 阴性对照：

       每批次检测同步过滤无菌稀释液作为阴性对照（应无菌生长）。

  2. 方法适用性验证：

       首次检验前或方法变更时，需进行方法适用性试验（确认无抑菌性干扰）。

  3. 记录要求：

       完整记录过滤体积、培养温度、菌落形态、计数过程及最终计算结果。

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操作流程图解

graph LR
    A[准备灭菌物料] --> B[取样200ml纯化水]
    B --> C[无菌过滤+冲洗]
    C --> D[滤膜转移至培养基]
    D --> E{双培养基培养}
    E --> F[细菌培养 30-35℃ 3-5天]
    E --> G[霉菌酵母菌培养 23-28℃ 5-7天]
    F & G --> H[菌落计数]
    H --> I[判定：≤100 CFU/ml？]
    I -->|是| J[合格]
    I -->|否| K[不合格]



依据：《中国药典》四部通则1105明确要求纯化水微生物检测采用薄膜过滤法，并规定了上述培养条件及限值。企业需建立SOP并保存原始记录备查。

Onexzr

安安份份的小尘1 发表于 2025-8-20 06:55
根据《中国药典》四部通则1105 非无菌产品微生物限度检查法及GMP规范要求，纯化水微生物限度检验的标准操作 ...

老师  是不是不管纯化水稀释几倍   培养的最终结果没有长菌一律按＜10CFU/ml来报告结果呀  

大橙子Cecelia

不见猫骨头 发表于 2025-8-18 12:33
先用冲洗液润膜（至于说用氯化钠溶液还是pH7.0看你们自己，润膜量看你们自己规定，能让膜湿润就行，你们在S ...

老师我想问一下，我们纯化水是用10ml过滤，这个量的话还需要润洗膜吗？

不见猫骨头

大橙子Cecelia 发表于 2025-10-16 16:56
老师我想问一下，我们纯化水是用10ml过滤，这个量的话还需要润洗膜吗？

建议润膜，有些时候10ml或者更多过膜后，部分位置还是没有湿润，对结果可能会有影响